其他方法在一些實(shí)施方式中,還可以通過(guò)其他序列缺失、糖基化修飾和化學(xué)修飾等手段達(dá)到降低抗體與fc受體的親和力的目的。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,對(duì)抗體表達(dá)序列進(jìn)行改造,表達(dá)和純化抗體的fab片段。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,對(duì)抗體表達(dá)序列中的n297進(jìn)行突變,可以獲得重鏈無(wú)糖基化修飾的抗體(non-glycosylatedheavych**n,nghc)。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,用糖苷內(nèi)切酶(endoglycosidase)對(duì)抗體進(jìn)行處理,可以獲得糖基缺失或是糖基重排的抗體。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,用化學(xué)偶聯(lián)(conjugation)對(duì)抗體進(jìn)行處理,可以獲得側(cè)鏈修飾或偶聯(lián)了形成空間位阻基團(tuán)的抗體??梢岳斫?,本發(fā)明所涉及的改造抗體方法不限于上述序列替換、點(diǎn)突變、序列插入、序列缺失、糖基化修飾和化學(xué)修飾這幾種,只要是經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)改造降低了與fc受體的親和力且不影響與目標(biāo)分子的結(jié)合力的方法均可。抗體改造范圍在一些實(shí)施方式中,上述細(xì)胞培養(yǎng)用抗體為抗cd3抗體、抗cd16抗體、抗cd28抗體、抗cd52抗體或抗cd137抗體。例如,鼠抗人cd3的抗體ucht1、鼠抗人cd16的抗體3g8、鼠抗人cd28的抗體cd-28、鼠抗人cd52的人源化campath-1h單抗和抗人cd137的小鼠單抗4c1a9等。在一些實(shí)施方式中。減血清培養(yǎng)基減少了血清對(duì)細(xì)胞的影響。安徽F12細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)口
圖9為培養(yǎng)實(shí)例2中原型抗體okt3與改造實(shí)例3制備的acd3-sh對(duì)nkt細(xì)胞擴(kuò)增的曲線圖;圖10為培養(yǎng)實(shí)例3中采用改造抗體組擴(kuò)增獲得的細(xì)胞與采用原型抗體組擴(kuò)增獲得的細(xì)胞的流式細(xì)胞分析圖;圖11為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)raji細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖12為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)bt-474細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖13為應(yīng)用實(shí)例1中試驗(yàn)組nk細(xì)胞產(chǎn)品和對(duì)照組nk細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)mcf7細(xì)胞的殺傷試驗(yàn)結(jié)果圖;圖14為應(yīng)用實(shí)例2中兩組小鼠體內(nèi)的腫*成像信號(hào)強(qiáng)度圖;圖15為應(yīng)用實(shí)例3中各組小鼠的存活曲線圖;圖16為應(yīng)用實(shí)例3中各組小鼠的腫*成像圖。具體實(shí)施方式為了便于理解本發(fā)明,下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更***的描述,并給出了本發(fā)明的較佳實(shí)施例。但是,本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn),并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地,提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的理解更加透徹***。除非另有定義,本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域:的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的,不是旨在于限制本發(fā)明。湖南1640RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基哪個(gè)好MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營(yíng)養(yǎng)成分。
如、糖尿病足等)和皮膚**老為目的的化妝品中,吸引了眾多的研究者開(kāi)發(fā)新的方法與技術(shù),提高msc-cm的產(chǎn)量,增強(qiáng)其生物學(xué)功能,降低產(chǎn)品制備的成本。研究表明鋰離子是一種雙向調(diào)節(jié)的化合物,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的研究表明適量的鋰元素有助于骨質(zhì)的形成,同時(shí)適量的鋰元素對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞也具有保護(hù)作用,培養(yǎng)基中低濃度的鋰離子可以促進(jìn)msc的增殖,而高濃度的鋰離子則會(huì)**msc的增殖與分化。普遍認(rèn)為,鋰離子有助于骨質(zhì)形成與神經(jīng)保護(hù)作用是由于鋰離子促進(jìn)了msc的增殖和分化,而對(duì)于是否鋰離子的使用使msc所分泌的活性因子有所增加,改善了細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境,目前未見(jiàn)報(bào)道。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加低濃度的氯化鋰將有助于提高msc-cm中活性物質(zhì)的產(chǎn)量?,F(xiàn)有技術(shù)中的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法在使用時(shí),不僅使用效果不好,間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基中含有活細(xì)胞,在使用細(xì)胞時(shí)具有免*排斥、潛在的致*性、不易保存與運(yùn)輸?shù)热秉c(diǎn),而且間充質(zhì)干細(xì)胞的利用率低,提高了間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備成本。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服以上技術(shù)缺陷,提供一種使用效果好、利用率高、成本低的一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基用于化妝品的制備方法。
特別是l235的側(cè)鏈與fcγriii的疏水相互作用。在一些推薦實(shí)施方式中,將l235突變?yōu)槠渌被幔貏e是帶電荷的氨基酸(谷氨酸glu,天冬氨酸asp,精氨酸arg,賴氨酸lys)或是存在空間位阻的大基團(tuán)側(cè)鏈氨基酸(苯丙氨酸phe等),可以減弱抗體與fc受體的結(jié)合。在一些推薦實(shí)施方式中,將l234突變?yōu)槠渌被?,特別是影響主鏈構(gòu)象的氨基酸(甘氨酸gly,脯氨酸pro),可以減弱抗體與fc受體的結(jié)合。higg1的p329參與了與hfcγriii的結(jié)合,特別是與fcγriii的疏水相互作用。在一些推薦實(shí)施方式中,將p329突變?yōu)槠渌被?,特別是帶電荷的氨基酸或是不帶電荷的極性氨基酸(絲氨酸ser,蘇氨酸t(yī)hr等),可以減弱抗體與fc受體的結(jié)合。在一個(gè)更加推薦的實(shí)施方式中,對(duì)higg1進(jìn)行l(wèi)234a、l235r、p329d和a330s突變。序列插入在一些實(shí)施方式中,上述序列插入是將將來(lái)源于亞型igg1、igg3抗體的cdr插入到igg2抗體或igg4抗體的骨架上。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,將這些cdr插入到igg4抗體的骨架上。在一個(gè)推薦實(shí)施方式中,將這些cdr插入到進(jìn)行了其他所述改造了的、與fc受體的親和力降低的抗體的骨架上。在一個(gè)更加推薦的實(shí)施方式中,將這些cdr插入到進(jìn)行了所述點(diǎn)突變改造的igg1抗體的骨架上。無(wú)酚紅培養(yǎng)基適用于對(duì)酚紅敏感的實(shí)驗(yàn)設(shè)置。
加入無(wú)菌-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無(wú)菌%(w/v)碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積,加注射用水(20℃~30℃)至規(guī)定體積,混勻。(4)如果必要,用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(5)溶液應(yīng)在2℃-8℃下避光保存。具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說(shuō)明書(shū)1)細(xì)胞培養(yǎng)用水一般為三蒸水(經(jīng)石英蒸餾器蒸餾)或超純水,醫(yī)*生產(chǎn)上一般為注射用水。2)建議盡量選擇與所用量相匹配的包裝一次使用,因?yàn)榘b一旦打開(kāi),組分可能會(huì)變質(zhì)或因受潮而結(jié)團(tuán)。3)溶解干粉培養(yǎng)基時(shí)先加入終體積90%-95%的培養(yǎng)用水,添加劑加完后再補(bǔ)足。4)如需添加的組分較多時(shí),某一組分完全溶解后,再添加另一組分。5)待培養(yǎng)基完全溶解后再加入碳酸氫鈉,以免產(chǎn)生沉淀。6)所有成分完全溶解后,培養(yǎng)基應(yīng)立即過(guò)濾或高壓**,以免產(chǎn)生沉淀或有微生物污染。7)在過(guò)濾**時(shí),一般情況下應(yīng)調(diào)pH比所需值低~,因過(guò)濾**后,pH值會(huì)升高約。8)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,建議不加或加少量的***,如血清的濃度較低則所加***的量也要相應(yīng)降低一些。9)建議用1NHCl或1NNaOH來(lái)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,因?yàn)橛锰妓釟溻c來(lái)調(diào)對(duì)培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。**培養(yǎng)基的**方法主要有兩種,高壓**及**。與過(guò)濾相比,高壓**的工作強(qiáng)度小。無(wú)血清培養(yǎng)基適用于敏感細(xì)胞系的培養(yǎng)和研究。山東基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)
F12培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),支持細(xì)胞的生長(zhǎng)。安徽F12細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)口
lnserserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplysargvalgluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglualaarggly0glyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasngly0lysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuaspserproileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpropro0valleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys4503449prt人工序列。安徽F12細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)口