才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外,還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細(xì)胞的主要成份,也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感,水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物,細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過(guò)純化,品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長(zhǎng),主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺,其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類主要是六碳糖,目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來(lái)源,因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖,含量一般為5~25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí),細(xì)胞主要通過(guò)擴(kuò)散作用吸收葡萄糖,細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動(dòng)力;在葡萄糖濃度較低時(shí),主要由鈉離子推動(dòng)的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。減血清培養(yǎng)基減少了血清對(duì)細(xì)胞的影響。西藏DMEM高糖培養(yǎng)基價(jià)目表
K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,細(xì)胞內(nèi)K+對(duì)于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+在細(xì)胞外液中的作用是將**內(nèi)部細(xì)胞之間相互粘著,在細(xì)胞內(nèi)參與許多重要的細(xì)胞生理活動(dòng),如傳導(dǎo)、參與肌肉細(xì)胞收縮等。在懸浮培養(yǎng)時(shí),為了減少細(xì)胞的聚集和附著,要減少Ca2+的濃度。Mg2+是構(gòu)成細(xì)胞間質(zhì)的重要成分,對(duì)于細(xì)胞間相互穩(wěn)定結(jié)合有很重要的意義。磷的化合物對(duì)細(xì)胞物質(zhì)代謝和生理功能調(diào)控有重要作用。其他成分:肽、核苷、嘌呤等??蓭椭?xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長(zhǎng)。分類低血清細(xì)胞培養(yǎng)基概述營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基是維持細(xì)胞活性及高密度生長(zhǎng)的基礎(chǔ),營(yíng)養(yǎng)缺乏容易引起細(xì)胞凋亡,新生牛血清中所含大部分營(yíng)養(yǎng)成分可以通過(guò)化學(xué)成分明確的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸維生素等成分組合取代。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分大優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,*需添加1%~5%新生牛血清,而對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、形態(tài)、活性和功能沒(méi)有影響甚至有所改善。在國(guó)外低血清培養(yǎng)基早已有之,如Gibco等。但是他們的低血清培養(yǎng)基是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中選擇性的加入重組胰島素(recombinantinsulin)、人源轉(zhuǎn)鐵蛋白(human(holo)tran-sferrin)以及牛血清白蛋白等,有些還包含一些生長(zhǎng)因子。中國(guó)澳門RPMI1640培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)F12培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng),支持細(xì)胞增殖。
第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***;在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中,消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來(lái)微生物污染的前提。(一)術(shù)語(yǔ)消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無(wú)菌(asepsis)是常用術(shù)語(yǔ)。下面就術(shù)語(yǔ)概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。(如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。)(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言,消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無(wú)菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱無(wú)菌操作。無(wú)菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過(guò)濾等。
附圖說(shuō)明圖1是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥無(wú)菌苗培養(yǎng)的對(duì)比效果圖,a:無(wú)菌苗在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況;b:無(wú)菌苗蓮座葉及根系發(fā)育;c:萌發(fā)率;d主根長(zhǎng)度;a和b中bar=;圖2是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,蘭茲貝格型擬南芥無(wú)菌植株培養(yǎng)的對(duì)比效果圖,a:無(wú)菌植株在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況;b:無(wú)菌植株地上部分及根系發(fā)育;c:無(wú)菌植株花***發(fā)育(左)和花粉的亞歷山大染色(右);d:主根長(zhǎng)度;e:株高;f:蓮座葉長(zhǎng)度;g:成熟花粉活力;a中bar=、b中bar=、c中花***bar=、c中花粉bar=15um;圖3是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,油菜無(wú)菌苗培養(yǎng)的對(duì)比效果圖,a:無(wú)菌植株在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況;b:無(wú)菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:主根長(zhǎng);f:大于;a中bar=、b中bar=;圖4是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,馬鈴薯無(wú)菌苗培養(yǎng)的對(duì)比效果圖,a:無(wú)菌植株在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況;b:無(wú)菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:根數(shù);a和b中bar=;圖5是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥葉片及根愈傷**誘導(dǎo)的對(duì)比效果圖,a:葉片愈傷**;b:葉片愈傷**誘導(dǎo)率;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導(dǎo)率;a和c中bar=;圖6是cs和ms兩種培養(yǎng)基上。MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本環(huán)境。
實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組3選用發(fā)酵中期添加琥珀酸,此時(shí),菌體增殖放緩,以產(chǎn)酸為主,琥珀酸對(duì)三羧酸循環(huán)有正向促進(jìn)作用,而對(duì)乙醛酸循環(huán)途徑起**作用,從而導(dǎo)致谷氨酸產(chǎn)量的增加;梯度試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),琥珀酸添加量過(guò)**于10g/l),并不會(huì)對(duì)谷氨酸產(chǎn)量帶來(lái)進(jìn)一步的提升,綜合成本考慮,選擇低于10g/l的添加量較為合適。對(duì)照組2和實(shí)驗(yàn)組在發(fā)酵中后期添加殼聚糖,能夠改變細(xì)胞壁的通透性,促進(jìn)谷氨酸分泌到胞外,從而提升谷氨酸產(chǎn)量和糖酸轉(zhuǎn)化率;但是殼聚糖添加量(超過(guò)100mg/l)過(guò)大會(huì)導(dǎo)致抑菌現(xiàn)象發(fā)生,進(jìn)而造成菌株死亡。雖然,上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述,但在本發(fā)明基礎(chǔ)上,可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn),或在實(shí)施案例之外的樹(shù)種實(shí)施本方法,這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此,在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改,改進(jìn)或范圍的擴(kuò)大,均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。RPMI1640培養(yǎng)基確保了細(xì)胞的高效生長(zhǎng)。福建減血清培養(yǎng)基價(jià)目表
F12培養(yǎng)基在細(xì)胞分化和基因表達(dá)研究中有重要應(yīng)用。西藏DMEM高糖培養(yǎng)基價(jià)目表
所以做過(guò)強(qiáng)檢的**器還必須進(jìn)行**效果的驗(yàn)證。一些單位常常忽略了這個(gè)重要的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)市售的手提**器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但**物品的實(shí)際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致**物品不徹底,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)基**不徹底,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣**器無(wú)菌效果的驗(yàn)證是一個(gè)必須引起重視的問(wèn)題。(三)**時(shí)的注意事項(xiàng)使用高壓蒸氣**器時(shí),首先應(yīng)注意在開(kāi)放蒸氣的同時(shí),排除**器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,才可關(guān)閉排氣孔。假如**器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí),剛壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值,但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多,剛二者相差也越大。差也越大,器內(nèi)溫度不足,**則不徹底。表蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)密度(kg/cm2)溫度(℃)1126表高壓蒸汽**器中溫度與冷空氣排出量的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)所達(dá)溫度。西藏DMEM高糖培養(yǎng)基價(jià)目表