文獻(xiàn)2“混合硝酸稀土對(duì)谷氨酸產(chǎn)生菌的影響，氨基酸雜志”發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的稀土元素，能夠提高谷氨酸的產(chǎn)量。申請(qǐng)人之前的**技術(shù)“一種谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基制備方法”，在常規(guī)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，通過(guò)添加菌體蛋白浸膏來(lái)替代酵母膏氮源，不但節(jié)約了成本，還能提高氨基酸發(fā)酵產(chǎn)率，一舉兩得。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：在已有發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，申請(qǐng)人針對(duì)微生物發(fā)酵的特點(diǎn)，繼續(xù)進(jìn)行了改進(jìn)，以提高發(fā)酵效率，據(jù)此，提出了一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b；所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加，然后間隔12h以上添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。進(jìn)一步地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖，酵母浸膏，k2hpo4，mgso4·7h2o，2-羥基乙胺，cecl3，mnso4·h2o，feso4·7h2o，vb1，生物素；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph，**，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。進(jìn)一步地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸，尿素，殼聚糖；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph，**，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖50-100g/l，酵母浸膏10-30g/l，k2hpo41-5g/l。無(wú)血清培養(yǎng)基確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高度準(zhǔn)確性。江蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基供應(yīng)商家

    另外，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過(guò)程中會(huì)造成干擾，并且具有一定的固醇類***樣作用，如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)?，F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過(guò)改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì)，常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在～。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。安徽DMEM/F12培養(yǎng)基包括RPMI1640培養(yǎng)基含有多種關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分，支持細(xì)胞生長(zhǎng)。

    1)、初代培養(yǎng)：繡球外植體，將葉片剪去，自來(lái)水沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75％酒精中消毒30s，用無(wú)菌水沖洗3～4次。使用白貓漂白水和無(wú)菌水按1：4的體積比配制消毒液，將外植體放入消毒液浸泡40min，其中白貓漂白水為上海白貓(集團(tuán))有限公司生產(chǎn)的“白貓”牌家用漂白水。消毒完成，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立無(wú)菌再生系統(tǒng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)6～8周。其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基為ms+～～，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的ph值為。(2)、繼代培養(yǎng)：以建立的無(wú)菌再生系統(tǒng)為對(duì)象，將無(wú)菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，其中增殖培養(yǎng)基為ms+～～，培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)8～12周。每隔8～12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基的ph值為。(3)、生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的繡球組培苗，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，其中生根培養(yǎng)基為1/2ms+～～，生根培養(yǎng)基的ph值為。誘導(dǎo)培養(yǎng)環(huán)境為光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度25℃，光照時(shí)間16h；黑暗條件下，溫度23℃，光照時(shí)間8h，培養(yǎng)8～12周。。

    這些重組蛋白和動(dòng)物來(lái)源成分對(duì)生物制品的安全性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來(lái)干擾和差異的風(fēng)險(xiǎn)，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞，在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，易使細(xì)胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有不良影響，易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率。獲取同樣的細(xì)胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時(shí)間，可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞，在本實(shí)驗(yàn)情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實(shí)踐證明效果良好。采DMEM。無(wú)血清培養(yǎng)基適合于無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。

    留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前，需將溫度計(jì)的**柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)存l℃之間，則說(shuō)明**器內(nèi)的溫度分布是均勻的。**后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下放入**后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時(shí)，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說(shuō)明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，**仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說(shuō)明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)**的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽(yáng)性對(duì)照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣**時(shí)，由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺，并與對(duì)照色相比，可判斷**效果是否達(dá)到要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色，影響**效果的觀測(cè)。高壓蒸氣**必須使蒸氣順利進(jìn)入**器內(nèi)，與**物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到**的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過(guò)總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次，共做六次。5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃，化學(xué)指示卡變黑；程度與對(duì)照色一致；培養(yǎng)基均未改變顏色，說(shuō)明高壓蒸氣**效果合格。高壓**器屬于強(qiáng)檢儀器，但強(qiáng)檢只是對(duì)儀器物理參數(shù)的考核。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基采購(gòu)

無(wú)血清培養(yǎng)基為細(xì)胞培養(yǎng)提供了更清晰的背景。江蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基供應(yīng)商家

    實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組3選用發(fā)酵中期添加琥珀酸，此時(shí)，菌體增殖放緩，以產(chǎn)酸為主，琥珀酸對(duì)三羧酸循環(huán)有正向促進(jìn)作用，而對(duì)乙醛酸循環(huán)途徑起**作用，從而導(dǎo)致谷氨酸產(chǎn)量的增加；梯度試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，琥珀酸添加量過(guò)**于10g/l），并不會(huì)對(duì)谷氨酸產(chǎn)量帶來(lái)進(jìn)一步的提升，綜合成本考慮，選擇低于10g/l的添加量較為合適。對(duì)照組2和實(shí)驗(yàn)組在發(fā)酵中后期添加殼聚糖，能夠改變細(xì)胞壁的通透性，促進(jìn)谷氨酸分泌到胞外，從而提升谷氨酸產(chǎn)量和糖酸轉(zhuǎn)化率；但是殼聚糖添加量（超過(guò)100mg/l）過(guò)大會(huì)導(dǎo)致抑菌現(xiàn)象發(fā)生，進(jìn)而造成菌株死亡。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，或在實(shí)施案例之外的樹(shù)種實(shí)施本方法，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改，改進(jìn)或范圍的擴(kuò)大，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。江蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基供應(yīng)商家