如何正確地使用培養(yǎng)基及**大程度地保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)以維持細(xì)胞的生長，對每個培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細(xì)胞種類的不同而存在差異。細(xì)胞培養(yǎng)液的構(gòu)成細(xì)胞培養(yǎng)液指細(xì)胞生長的液體環(huán)境，一般指完全培養(yǎng)液，添加了血清、水解乳蛋白、各種添加劑等可以直接使用的培養(yǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)基&血清模式血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細(xì)胞系來說是需要的，因為大多數(shù)單獨的培養(yǎng)基并不能提供細(xì)胞生長所需要的全部營養(yǎng)，如MEM培養(yǎng)基，較為常用的量為5％～10％的比例，而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3％左右，細(xì)胞的形態(tài)和功能不受影響。細(xì)胞培養(yǎng)基&乳歐液模式化學(xué)合成培養(yǎng)基現(xiàn)雖已大規(guī)模使用，但在某些培養(yǎng)領(lǐng)域水解乳蛋白仍在使用，以補充培養(yǎng)液中缺乏的氨基酸、小肽物質(zhì)。較為常用的方式是用漢氏（Hanks’BSS）或歐式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白（一般為5‰濃度），即成乳漢（歐）液，再與化學(xué)合成培養(yǎng)基（一般為MEM）按比例混合使用（如1：1）。細(xì)胞培養(yǎng)基&各類添加劑（生長因子等）模式成分復(fù)雜的培養(yǎng)基還含有許多化合物，包括蛋白質(zhì)、多肽、核苷、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、**酸及脂類等。RPMI1640培養(yǎng)基提高了細(xì)胞的存活率和生長速率。中國香港MEM培養(yǎng)基價目表

    第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗證消毒**在醫(yī)學(xué)實踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴散造成的危害；也可殺滅物品或器皿上的**，防止醫(yī)院***；在醫(yī)學(xué)微生物檢驗的領(lǐng)域中，消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗不受外來微生物污染的前提。（一）術(shù)語消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和無菌(asepsis)是常用術(shù)語。下面就術(shù)語概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。（如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。）(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法，但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計、新潔爾滅液擦拭檢查臺等。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言，消毒對象是指物體而不是機體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無菌。防止***病原體進入****或物品的操作技術(shù)稱無菌操作。無菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過濾等。中國臺灣MEM培養(yǎng)基包括什么F12培養(yǎng)基能夠支持細(xì)胞的持續(xù)分裂。

    這些重組蛋白和動物來源成分對生物制品的安全性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞，在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，易使細(xì)胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對細(xì)胞有不良影響，易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率。獲取同樣的細(xì)胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞，在本實驗情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實踐證明效果良好。采DMEM。

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。（四）、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點***是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作要求低，適于手動操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進行反復(fù)的加熱和冷卻，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**；發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點***是**溫度高，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定，**質(zhì)量穩(wěn)定；易于實現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點是對設(shè)備的要求高，需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作較麻煩；染菌的機會較多；不適合于含大量固體物料的**；對蒸汽的要求高。由此可見，無論在理論上或者在實踐上，與間歇**過程相比，連續(xù)**的***十分明顯。因此，連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。無血清培養(yǎng)基有助于細(xì)胞在無血清環(huán)境中的生長。

    若應(yīng)用于植物培養(yǎng)中的液體培養(yǎng)基制作，可不用調(diào)節(jié)ph，用超純水(ph為)充分溶解后定容，便可直接應(yīng)用于大多數(shù)植物水培。培養(yǎng)實例1：哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)(1)種子保存及消毒方法：a、擬南芥種子保存方法：哥倫比亞(col,columbia)型擬南芥種子成熟后，收取種子于，加入3-8顆變色**干燥劑，用封口膜密封后置于4℃長期保存；b、擬南芥種子**消毒方法：取出經(jīng)低溫干燥保存的種子，于無菌環(huán)境下，將適量種子置于無菌，加入適量體積的無菌水，將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s，小心倒掉上清，重復(fù)3次；加入75％酒精，將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s，小心倒掉上清；用無菌水清洗3次，低速離心10s后去除上清；加入適量體積的5％naclo溶液，將離心管上下顛倒10-20次，低速離心10s后倒掉上清，重復(fù)2次；用無菌水清洗3次，低速離心10s后去除上清；加入無菌水，使種子完全浸泡在無菌水中，于4℃放置48h后播種。在種子質(zhì)量良好的情況下，利用上述方法保存及消毒的無菌擬南芥種子，萌發(fā)率極高且?guī)缀跬瑫r出苗。(2)生長培養(yǎng)基配制：1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l，用超純水溶解，。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。使用減血清培養(yǎng)基能減少實驗的變異性。河北RPMI1640培養(yǎng)基供應(yīng)商

無血清培養(yǎng)基為細(xì)胞培養(yǎng)提供了更清晰的背景。中國香港MEM培養(yǎng)基價目表

    二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進行判斷，需要實驗員的經(jīng)驗積累，存在較大的主觀性。實際上，個性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過pH計或者pH電極進行pH值的檢測，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降；打開培養(yǎng)器具時CO2逸出則會引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值：H2O+CO2→H2CO3?H++HCO3－NaHCO3?Na++HCO3－此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低，在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH~。高濃度的HEPES可能對細(xì)胞**性作用，細(xì)胞培養(yǎng)時HEPES的添加濃度一般為10～25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中，大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對滲透壓有一定耐受性。研究顯示。中國香港MEM培養(yǎng)基價目表