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對于大多數(shù)哺乳類動物細胞,滲透壓在260~320mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細胞培養(yǎng)基的過程中,滲透壓的測定較為重要,有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動物細胞過程,在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控,防止?jié)B透壓過高對細胞的損害。溫度溫度對細胞培養(yǎng)基有較大的影響,溫度過高可引起營養(yǎng)成份的降解或破壞,細胞培養(yǎng)基的pH、離子強度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺,在高溫條件下降解的速度較快,如35℃貯存時,放置3天降解25%左右,在4℃貯存3周降解約20%。粘滯性及表面張力含血清細胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細胞時,培養(yǎng)液的粘滯性對細胞生長沒有多大影響;但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細胞時,細胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對細胞造成的損傷程度。表面張力對細胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應(yīng)器進行懸浮培養(yǎng)時,攪拌和通氣都會引起泡沫的產(chǎn)生。對于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運動對細胞的損傷程度還有爭議,但氣泡的破裂對細胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷。無血清培養(yǎng)基適合于無血清環(huán)境的細胞培養(yǎng)。江蘇F12培養(yǎng)基大概價格多少
促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s4中,將s3中的無菌外植體接入增殖培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術(shù)方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免增殖培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng),植物材料能夠快速適應(yīng)增殖培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s4中,每隔8~12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基。通過采用上述技術(shù)方案,經(jīng)過8~12周后,增殖培養(yǎng)基的效果將會減弱,植物材料也會污染增殖培養(yǎng)基,需要及時更換。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s5中,將s4中的繡球組培苗接入生根培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術(shù)方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免生根培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng),植物材料能夠快速適應(yīng)生根培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s2中,外植體消毒的具體步驟為將樹莓外植體葉片剪去,自來水沖洗干凈。湖南MEM培養(yǎng)基哪家便宜無酚紅培養(yǎng)基在細胞實驗中減少了不必要的干擾。
發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,cecl30-40mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;發(fā)酵工藝同實施例1,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基。設(shè)置cecl3的添加濃度為0,,如圖1-2所示,隨著cecl3添加量的增加,菌體濃度和谷氨酸含量均有所提升,當(dāng)添加量為10mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,然后出現(xiàn)下降趨勢,但是整個過程中,糖酸轉(zhuǎn)化率沒有明顯改變(附圖未顯示);說明cecl3稀土鹽能夠促進菌株增殖,提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力,提高谷氨酸的產(chǎn)量,但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡,谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降。二、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l,在此基礎(chǔ)上,研究2-羥基乙胺對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。設(shè)置2-羥基乙胺的濃度為,5,10,20,40,80,160mg/l,如圖3-4所示,隨著2-羥基乙胺添加量的增加,菌體濃度隨之增加,相應(yīng)地,谷氨酸含量和糖酸轉(zhuǎn)化率也有所提升,當(dāng)添加量為40mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,繼續(xù)增加2-羥基乙胺的濃度,產(chǎn)生明顯的抑菌效果,菌株密度下降明顯;原因是,低濃度的2-羥基乙胺可能促進磷脂酰乙醇胺細胞壁組分的合成。
1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方(g/L)天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用**分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。其***是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種**提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。使用減血清培養(yǎng)基可以減少細胞培養(yǎng)中的血清干擾因素。
Nutrientagar)培養(yǎng)基品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項1.培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準方法,應(yīng)嚴格按其規(guī)定進行配制外.一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對.再依據(jù)自己的使用目的加以選用,記錄其來源。2.培養(yǎng)基的制備記品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬【分享】146種培養(yǎng)基的制備和大家一起分享bbs/images/品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬培養(yǎng)基制備的標(biāo)準操作程序(SOP)名稱:培養(yǎng)基制備的標(biāo)準操作程序(SOP)關(guān)鍵詞:培養(yǎng)基制備標(biāo)準操作程序目的:如何使用成品培養(yǎng)基干粉制備各種合格的分離培養(yǎng)基。背景知識:選填項目原理:選填項目主體內(nèi)容:操作步驟1.在玻璃容器中加入所需蒸餾水的二分之一量,品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬酵母培養(yǎng)基的制備一、目的要求了解合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基的配制原理。學(xué)習(xí)和掌握麥芽汁培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基和察氏培養(yǎng)基的配制方法。使用減血清培養(yǎng)基減少了實驗中血清帶來的變異性。湖南MEM培養(yǎng)基哪家便宜
MEM培養(yǎng)基常用于多種哺乳動物細胞的體外培養(yǎng)。江蘇F12培養(yǎng)基大概價格多少
如何正確地使用培養(yǎng)基及**大程度地保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)以維持細胞的生長,對每個培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細胞種類的不同而存在差異。細胞培養(yǎng)液的構(gòu)成細胞培養(yǎng)液指細胞生長的液體環(huán)境,一般指完全培養(yǎng)液,添加了血清、水解乳蛋白、各種添加劑等可以直接使用的培養(yǎng)液。細胞培養(yǎng)基&血清模式血清對于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長和增殖的大多數(shù)細胞系來說是需要的,因為大多數(shù)單獨的培養(yǎng)基并不能提供細胞生長所需要的全部營養(yǎng),如MEM培養(yǎng)基,較為常用的量為5%~10%的比例,而特殊的低血清培養(yǎng)基血清量可降至3%左右,細胞的形態(tài)和功能不受影響。細胞培養(yǎng)基&乳歐液模式化學(xué)合成培養(yǎng)基現(xiàn)雖已大規(guī)模使用,但在某些培養(yǎng)領(lǐng)域水解乳蛋白仍在使用,以補充培養(yǎng)液中缺乏的氨基酸、小肽物質(zhì)。較為常用的方式是用漢氏(Hanks’BSS)或歐式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白(一般為5‰濃度),即成乳漢(歐)液,再與化學(xué)合成培養(yǎng)基(一般為MEM)按比例混合使用(如1:1)。細胞培養(yǎng)基&各類添加劑(生長因子等)模式成分復(fù)雜的培養(yǎng)基還含有許多化合物,包括蛋白質(zhì)、多肽、核苷、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、**酸及脂類等。江蘇F12培養(yǎng)基大概價格多少