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河南DMEM/F12培養(yǎng)基哪個(gè)好

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-31

    此法由巴斯德創(chuàng)立,用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種:一種為℃加熱15秒,另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用第一種方法。(2)煮沸法。在1個(gè)大氣壓下,水煮沸后溫度達(dá)100℃,煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉,可將其沸點(diǎn)提高至105℃,既可促進(jìn)芽胞的殺滅,又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法,常用附諾(Amold)流通蒸氣**器,利用1個(gè)大氣壓下100℃水蒸氣進(jìn)行消毒,10-30分鐘后**繁殖體被殺死,但對芽孢作用不大。(4)間歇**法(fractionalsterilization)。采用間歇方式達(dá)到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內(nèi),100℃加熱15-30分鐘,每日1次,連續(xù)3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過夜,致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再通過流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復(fù),既可殺滅芽胞,又可使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。若某些物質(zhì)不耐100攝氏度,則可將溫度下降至75-80℃,每次加熱時(shí)間延長到30-60分鐘,常用血清凝固器對呂氏血清培養(yǎng)基和L-J培養(yǎng)基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave),在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內(nèi)壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。MEM培養(yǎng)基含有多種必需氨基酸和維生素,適合細(xì)胞培養(yǎng)。河南DMEM/F12培養(yǎng)基哪個(gè)好

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    平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS)簡稱鹽溶液,集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體,兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時(shí)供給細(xì)胞生存所必需的能量和無機(jī)離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液為例,它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會(huì)變堿,Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,需要用Earle’s液,。如果**是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的**,用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方(g/L)一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成分,同時(shí)參與許多重要的細(xì)胞功能活動(dòng)。但它們有使細(xì)胞凝集的作用,在配制分散細(xì)胞的消化液和特殊用途的細(xì)胞洗滌時(shí),宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,或者PBS液。概述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。河南DMEM/F12培養(yǎng)基哪個(gè)好F12培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),支持細(xì)胞的生長。

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    本發(fā)明屬于氨基酸生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域:,具體涉及一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基。背景技術(shù)::谷氨酸,是一種酸性氨基酸。分子內(nèi)含兩個(gè)羧基,化學(xué)名稱為α-氨基戊二酸。谷氨酸是里索遜1856年發(fā)現(xiàn)的,為無色晶體,有鮮味,微溶于水,而溶于鹽酸溶液,等電點(diǎn)。大量存在于谷類蛋白質(zhì)中,動(dòng)物腦中含量也較多。谷氨酸在生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝過程中占重要地位,參與動(dòng)物、植物和微生物中的許多重要化學(xué)反應(yīng)。谷氨酸鈉俗稱味精,是重要的鮮味劑,對香味具有增強(qiáng)作用。谷氨酸鈉***用于食品調(diào)味劑,既可單獨(dú)使用,又能與其它氨基酸等并用。用于食品內(nèi),有增香作用。在食品中濃度為,每人每天允許攝入量為0-120微克/千克(以谷氨酸計(jì))。在食品加工中一般用量為-。谷氨酸主要以微生物發(fā)酵制備而得,通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基,使得菌體增殖速率提高,可以提高氨基酸的產(chǎn)量。現(xiàn)有技術(shù)對谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化進(jìn)行了大量的研究,例如文獻(xiàn)1“基于pb試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對谷氨酸棒桿菌cnl021發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化,**釀造2014年”,通過**陡爬坡試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對發(fā)酵培養(yǎng)基組成進(jìn)行優(yōu)化,得到谷氨酸棒桿菌**適發(fā)酵培養(yǎng)基組,較未優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)酸量提高了。

    對于大多數(shù)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞,滲透壓在260~320mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細(xì)胞培養(yǎng)基的過程中,滲透壓的測定較為重要,有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯(cuò)誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞過程,在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控,防止?jié)B透壓過高對細(xì)胞的損害。溫度溫度對細(xì)胞培養(yǎng)基有較大的影響,溫度過高可引起營養(yǎng)成份的降解或破壞,細(xì)胞培養(yǎng)基的pH、離子強(qiáng)度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細(xì)胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺,在高溫條件下降解的速度較快,如35℃貯存時(shí),放置3天降解25%左右,在4℃貯存3周降解約20%。粘滯性及表面張力含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí),培養(yǎng)液的粘滯性對細(xì)胞生長沒有多大影響;但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí),攪拌和通氣都會(huì)引起泡沫的產(chǎn)生。對于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運(yùn)動(dòng)對細(xì)胞的損傷程度還有爭議,但氣泡的破裂對細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷。減血清培養(yǎng)基減少了血清成分的變異性。

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    另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會(huì)造成干擾,并且具有一定的固醇類***樣作用,如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)?,F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測技術(shù),生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外,可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì),常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來測定。在細(xì)胞生長過程中,隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。無血清培養(yǎng)基有助于細(xì)胞在無血清環(huán)境中的生長。湖北減血清培養(yǎng)基聯(lián)系方式

無血清培養(yǎng)基提供了無血清的純凈環(huán)境。河南DMEM/F12培養(yǎng)基哪個(gè)好

    培養(yǎng)實(shí)例7和對比培養(yǎng)例7的誘導(dǎo)結(jié)果比較::用上述方法進(jìn)行水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷**形態(tài)大小均相近,出愈率均為100%。如圖7所示。培養(yǎng)實(shí)例8:液體培養(yǎng)基在植物水培中的應(yīng)用(1)用不同ph的超純水配制的液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較:a、用不同ph的超純水配制液體培養(yǎng)基:通常多種因素會(huì)導(dǎo)致相同超純水制水機(jī)產(chǎn)出的超純水ph變動(dòng)較大,ph通常為。分別選取ph為、、、、、,分別配制ms液體培養(yǎng)基、cs液體培養(yǎng)基、1/2ms液體培養(yǎng)基、1/2cs液體培養(yǎng)基,制作方法為:ms液體培養(yǎng)基為取ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;cs液體培養(yǎng)基為取cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2ms液體培養(yǎng)基為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l;1/2cs液體培養(yǎng)基為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l。b、結(jié)果為:用ph為,ms液體培養(yǎng)基ph為,cs液體培養(yǎng)基ph為,1/2ms液體培養(yǎng)基ph為,1/2cs液體培養(yǎng)基ph為。植物**適宜生長的ph一般為,觀察可知,ms液體培養(yǎng)基及1/2ms液體培養(yǎng)基的ph偏酸性且波動(dòng)較大,其應(yīng)用于液體培養(yǎng)基時(shí)通常需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,相比之下。河南DMEM/F12培養(yǎng)基哪個(gè)好