(不含EDTA含酚紅)性質、用途與生產工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黃色無定形粉末。系從各種動物胰臟制取的混合物，主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇、醚。有引濕性，遇酸、堿及熱即喪失活力，水溶液遇酸、熱、重金屬或單寧酸時產生沉淀。為助消化藥，用于缺乏胰液的***癥。也用于皮革工業(yè)和紡織印染，主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經***、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎而得。簡介(不含EDTA含酚紅)為細胞培養(yǎng)基，1.不含EDTA含酚紅：含酚紅，（1：250）溶于HBSS溶液，不含鈣鎂。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚紅)含，不含EDTA和酚紅，溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化，通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數貼壁細胞。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說明---貼壁細胞Chemicalbook的消化：a)吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。b)加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過細胞即可，室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。c)顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化。 胰酶是一種復合消化酶制劑。廣西胰酶常見問題

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內的腸肽酶會活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質水解為肽進而分解為氨基酸，其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成，不含 EDTA，經過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數貼壁細胞。該溶液濃度較高，可以稀釋到相應濃度后使用。浙江國產胰酶進口實際消化后細胞狀態(tài)不會有太大差異，注意控制消化時間即可。

    胰酶使用注意：1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染。2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。貼壁細胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細胞消化時間有所不同）3、顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來。4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。如果發(fā)現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。常用的細胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質（如細胞外基質）水解，改變細胞間的連接。

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉速下處理2h，獲得濃度為。使用時用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，，在300-400r/min的轉速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉速為4000-6000r/min，時間10-15min收集、合并離心上層清液，進行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，在攪拌下加入等體積的反萃取液進行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次，每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉速為4000-6000r/min,時間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 細胞消化時，胰酶不去除對細胞的影響？

    胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸餾水5～10ml溶解。2.一般應用：1次5000單位，每日1次肌注，用量酌情而定。為防止疼痛，可加適量普魯卡因。局部用*視情而定，可配成溶液制劑（～，微堿性時活性**強）、噴霧劑、粉劑、油膏等，用作體腔內注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用結晶胰蛋白酶2000單位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀釋，以牙痕為中心，在傷口周圍作浸潤注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次。如病情需要可重復使用。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后，切開傷口排毒減壓（嚴重出血者例外），也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛，可用其***胰蛋白酶注意事項1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗，應注意可能產生過敏反應。2.吸取注射液后應另換針頭，以免注射時疼痛。3.外用時，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時內用畢。胰蛋白酶不良反應：1．注射局部疼痛、硬結。2．本品可引起組胺釋放，產生全身反應，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、***、頭暈、胸痛、***、皮疹、血管神經性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細胞減少等。癥狀輕時不影響繼續(xù)***，給予抗組胺*和對癥*物即可控制，嚴重時應即停*。3．本品偶可致過敏性休克。不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。廣西胰酶常見問題

如果消化液中含有胰酶和EDTA，好去除。廣西胰酶常見問題

胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為8.0、溫度為37°℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。廣西胰酶常見問題