參與細胞的代謝活動。此外,通過提供鈉,K+和Ca2+,幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。Na+是細胞外液中**主要的陽離子,對維持滲透壓的恒定有決定性的作用,還與Cl-共同參與生物電活動、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細胞內(nèi)液,對于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號傳導、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43-、SO42-、HCO3-是基質(zhì)所需陰離子,同時是細胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對于細胞的生長、代謝和調(diào)控都有重要的作用,含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構成細胞的主要成分,ATP、ADP是能量生成、存儲和利用的不可或缺的化合物。上述離子對于細胞的作用各有不同,它們共同構成了細胞賴以生存的滲透壓、pH和電化學平衡的微環(huán)境,細胞對于某種元素的吸收利用會受到其它元素的干擾,例如培養(yǎng)基中過高的鈣離子濃度會使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此,在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外,還需保證上述離子之間種類和比例的平衡。此外,微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對于細胞生長代謝和產(chǎn)物合成都有促進作用。無酚紅培養(yǎng)基在實驗中減少了潛在毒性。中國香港Ham's F12培養(yǎng)基代理商
導致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細胞培養(yǎng)基中**和霉菌,是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標準,并嚴于該標準,規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個,霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。細胞生長試驗這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞,因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述,這也是很多生物制*用戶要求的一項指標。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法,可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術》中細胞計數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng),前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)并計數(shù),檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)并計數(shù),檢查細胞培養(yǎng)基中是否有不利細胞生長的***。本試驗用細胞為VERO細胞。四、細胞培養(yǎng)基的使用方法細胞培養(yǎng)基的種類繁多,細胞培養(yǎng)方式也較多。中國澳門減血清培養(yǎng)基MEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動物細胞的體外培養(yǎng)和實驗研究。
但酚紅在無血清細胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細胞生長。碳酸氫鈉在細胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標準、安全量,是在科學的基礎上根據(jù)實踐經(jīng)驗所得。但是由于不同的細胞系(株)不同,同一株細胞適應環(huán)境也可能不同(細胞耐受性不同等),且存在的地域性水質(zhì)差異等,在實際生產(chǎn)過程中也可稍作改動,但使用者需做相應的檢測(理化及細胞生產(chǎn)試驗等)。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH~,在高濃度時對一些細胞可能**。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25mmol/L。**酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是在沒有葡萄糖的條件下,細胞也可以代謝**酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好單獨配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入細胞培養(yǎng)液中。
1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:中雙11號油菜種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)9d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,葉色濃綠,莖稈粗壯、平均莖中粗為,根系發(fā)達、平均根數(shù)為(>)、平均主根長為。如圖3所示。培養(yǎng)實例3和對比培養(yǎng)例3的培養(yǎng)結果比較:中雙11號油菜種子在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%;在相同條件下培養(yǎng)9d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,其株高、根的數(shù)目優(yōu)于1/2ms生長培養(yǎng)基,莖粗及平均主根長度與1/2ms生長培養(yǎng)基相近。如圖3所示。培養(yǎng)實例4:馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。培養(yǎng)方法:以克新18號馬鈴薯為例,將配制好的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,選擇生長旺盛的馬鈴薯脫毒苗,于無菌環(huán)境下,根據(jù)實際需要,用手術剪刀剪取約1cm長的至少帶有1個葉芽的莖端或莖段,用彎頭鑷子將其1/3-1/2長度垂直插入培養(yǎng)基中;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養(yǎng)。無血清培養(yǎng)基確保了實驗結果的高度準確性。
留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的**柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應存l℃之間,則說明**器內(nèi)的溫度分布是均勻的。**后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入**后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時,觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,**仍可在培養(yǎng)基中生長,分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)**的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照?;瘜W指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣**時,由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷**效果是否達到要求?;瘜W指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色,影響**效果的觀測。高壓蒸氣**必須使蒸氣順利進入**器內(nèi),與**物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達到**的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復三次,共做六次。5個點六次試驗表明溫度均在121℃,化學指示卡變黑;程度與對照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣**效果合格。高壓**器屬于強檢儀器,但強檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細胞的存活率。浙江無血清培養(yǎng)基市場報價
無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細胞。中國香港Ham's F12培養(yǎng)基代理商
促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s4中,將s3中的無菌外植體接入增殖培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免增殖培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應激反應,植物材料能夠快速適應增殖培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s4中,每隔8~12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基。通過采用上述技術方案,經(jīng)過8~12周后,增殖培養(yǎng)基的效果將會減弱,植物材料也會污染增殖培養(yǎng)基,需要及時更換。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s5中,將s4中的繡球組培苗接入生根培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免生根培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應激反應,植物材料能夠快速適應生根培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s2中,外植體消毒的具體步驟為將樹莓外植體葉片剪去,自來水沖洗干凈。中國香港Ham's F12培養(yǎng)基代理商