將蒸過的原料置于室溫下過夜,未被殺死的孢子便發(fā)芽生長,芽孢發(fā)育成營養(yǎng)細胞,再30min便可殺死。如此連續(xù)反復進行2-3次,亦可達到徹底**的目的。3、分批**的操作分批滅歇是在所用的發(fā)酵罐或其他培養(yǎng)裝置中進行的,它是在配制罐中配好培養(yǎng)基后,通過**管道輸入發(fā)酵罐等培養(yǎng)設備中,然后開始**。在進行培養(yǎng)基的間歇**之前,通常先將發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置的分空氣過濾器進行**,并且用空氣將分過濾器吹干。開始**時,應先放去夾套或蛇管中的冷水,開啟排氣管閥,通過空氣管向發(fā)酵罐內的培養(yǎng)基通入蒸汽進行加熱,同時,也可在夾套內通蒸汽進行間接加熱。當培養(yǎng)基溫度升到70℃左右時,從取樣管和放料管向罐內通入蒸汽進一步加熱,當溫度升至120℃,罐壓為1*105Pa(表壓)時,打開接種、補料、消泡劑、酸、堿等管道閥門進行排汽,當然在保溫過程中,應注意凡在培養(yǎng)基液面下的各種進口管道都應通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道則應排放蒸汽,這樣才能不留死角,從而保證**徹底。保溫結束后,依次關閉各排汽、進汽閥門,待罐內壓力低于空氣壓力后,向罐內通入無菌空氣,在夾套或蛇管中通冷水降溫,使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度,進行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。DMEM培養(yǎng)基提供了適宜的pH值和滲透壓。四川F12培養(yǎng)基價格信息
若應用于植物培養(yǎng)中的液體培養(yǎng)基制作,可不用調節(jié)ph,用超純水(ph為)充分溶解后定容,便可直接應用于大多數(shù)植物水培。培養(yǎng)實例1:哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)(1)種子保存及消毒方法:a、擬南芥種子保存方法:哥倫比亞(col,columbia)型擬南芥種子成熟后,收取種子于,加入3-8顆變色**干燥劑,用封口膜密封后置于4℃長期保存;b、擬南芥種子**消毒方法:取出經低溫干燥保存的種子,于無菌環(huán)境下,將適量種子置于無菌,加入適量體積的無菌水,將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s,小心倒掉上清,重復3次;加入75%酒精,將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s,小心倒掉上清;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入適量體積的5%naclo溶液,將離心管上下顛倒10-20次,低速離心10s后倒掉上清,重復2次;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入無菌水,使種子完全浸泡在無菌水中,于4℃放置48h后播種。在種子質量良好的情況下,利用上述方法保存及消毒的無菌擬南芥種子,萌發(fā)率極高且?guī)缀跬瑫r出苗。(2)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。山西DMEM/F12培養(yǎng)基常見問題MEM培養(yǎng)基含有必要的氨基酸和維生素。
生產上一般采用冷水噴淋冷卻,冷卻到40-50℃后,輸送到預先已經**過的罐內。(四)、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點***是設備要求低,不需另外設置加熱、冷卻裝置;操作要求低,適于手動操作,適合于小批量生產規(guī)模;適合于含有大量固體物質的培養(yǎng)基的**。缺點是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質損失較多,**后培養(yǎng)基的質量下降;需進行反復的加熱和冷卻,能耗較高;不適合于大規(guī)模生產過程的**;發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點***是**溫度高,可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質的損失;操作條件恒定,**質量穩(wěn)定;易于實現(xiàn)管道化和自控操作;避免了復的加熱和冷卻,提高了熱的利用率;發(fā)酵設備利用率高。缺點是對設備的要求高,需另外設置加熱、冷卻裝置;操作較麻煩;染菌的機會較多;不適合于含大量固體物料的**;對蒸汽的要求高。由此可見,無論在理論上或者在實踐上,與間歇**過程相比,連續(xù)**的***十分明顯。因此,連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。
cs液體培養(yǎng)基和1/2cs液體培養(yǎng)基在用不同ph超純水(ph為)配制時的ph都較為穩(wěn)定,在未調ph的情況下,可直接用于多種植物培養(yǎng)。如圖8所示。(2)以克新18號馬鈴薯無菌苗為例,觀察在未調ph和將ph調至:a、培養(yǎng)基制作方法:隨機選取超純水,測得其ph為,用于配制8種不同的液體培養(yǎng)基。第一種:1/2ms未調ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第二種:1/2cs未調ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第三種:ms未調ph液體培養(yǎng)基,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第四種:cs未調ph液體培養(yǎng)基,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第五種:1/,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調ph至;第六種:1/,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調ph至;第七種:,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調ph至;第八種:,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調ph至。b、培養(yǎng)方法:從培養(yǎng)實例4所述培養(yǎng)基獲得長勢**的馬鈴薯幼苗,在清水中緩苗2-3d后選取長勢一致的馬鈴薯幼苗,如圖9-a所示,置于上述8種不同液體培養(yǎng)基8d,每隔2d更新1次液體培養(yǎng)基;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基適用于多種類型的細胞培養(yǎng)實驗。
另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細胞培養(yǎng)基中。酚紅在產物純化過程中會造成干擾,并且具有一定的固醇類***樣作用,如雌***樣作用。當用于哺乳類動物細胞的培養(yǎng),可能會發(fā)生一些固醇類反應。現(xiàn)在商業(yè)化細胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調整。因生物反應器具有pH在線檢測技術,生物反應器培養(yǎng)動物細胞時,酚紅可完全去除。細胞保護劑是保護細胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質。在使用生物反應器培養(yǎng)動物細胞時,細胞易被機械攪拌和通氣鼓泡產生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優(yōu)化生物反應器結構和生產工藝外,可在細胞培養(yǎng)液中添加一些保護劑。其主要是通過改變細胞培養(yǎng)基物性或是對細胞具有保護作用的物質,常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細胞培養(yǎng)基的理化性質動物細胞在細胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質是細胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動物細胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細胞培養(yǎng)基的pH值通常需經校正的pH計來測定。在細胞生長過程中,隨細胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強。無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細胞。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基大概價格多少
無酚紅培養(yǎng)基減少了酚紅對細胞的影響。四川F12培養(yǎng)基價格信息
第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗證消毒**在醫(yī)學實踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***;在醫(yī)學微生物檢驗的領域中,消毒**是保正***的病原學檢驗不受外來微生物污染的前提。(一)術語消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無菌(asepsis)是常用術語。下面就術語概念加以敘述。(1)**。是用適當?shù)奈锢砘蚧瘜W手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。(如外科器械、注射器、基礎培養(yǎng)基**等。)(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計、新潔爾滅液擦拭檢查臺等。用于消毒的化學物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言,消毒對象是指物體而不是機體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無菌。防止***病原體進入****或物品的操作技術稱無菌操作。無菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過濾等。四川F12培養(yǎng)基價格信息