發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖80g/l,酵母浸膏20g/l,k2hpo42g/l,mgso4·7h2o50mg/l,cecl30-40mg/l,mnso4·h2o3mg/l,feso4·7h2o3mg/l,vb110mg/l,生物素7μg/l;發(fā)酵工藝同實施例1,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基。設(shè)置cecl3的添加濃度為0,,如圖1-2所示,隨著cecl3添加量的增加,菌體濃度和谷氨酸含量均有所提升,當(dāng)添加量為10mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,然后出現(xiàn)下降趨勢,但是整個過程中,糖酸轉(zhuǎn)化率沒有明顯改變(附圖未顯示);說明cecl3稀土鹽能夠促進菌株增殖,提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力,提高谷氨酸的產(chǎn)量,但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡,谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降。二、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l,在此基礎(chǔ)上,研究2-羥基乙胺對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。設(shè)置2-羥基乙胺的濃度為,5,10,20,40,80,160mg/l,如圖3-4所示,隨著2-羥基乙胺添加量的增加,菌體濃度隨之增加,相應(yīng)地,谷氨酸含量和糖酸轉(zhuǎn)化率也有所提升,當(dāng)添加量為40mg/l時,菌體濃度和谷氨酸含量達到峰值,繼續(xù)增加2-羥基乙胺的濃度,產(chǎn)生明顯的抑菌效果,菌株密度下降明顯;原因是,低濃度的2-羥基乙胺可能促進磷脂酰乙醇胺細胞壁組分的合成。減血清培養(yǎng)基提高了實驗的可重復(fù)性。遼寧培養(yǎng)基進貨價
才能滿足新細胞合成、細胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助營養(yǎng)物質(zhì)等。此外,還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細胞的主要成份,也是細胞賴以生存的主要環(huán)境。細胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細胞對水的品質(zhì)非常敏感,水的品質(zhì)將直接影響細胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機物、熱原等污染物,細胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過純化,品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。能源和碳源是用于維持細胞生命和支持細胞生長,主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺,其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細胞能夠利用的糖類主要是六碳糖,目前大多體外培養(yǎng)時選取葡萄糖作為細胞的主要碳源和能量來源,因此細胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖,含量一般為5~25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時,細胞主要通過擴散作用吸收葡萄糖,細胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細胞吸收葡萄糖的動力;在葡萄糖濃度較低時,主要由鈉離子推動的高親和性轉(zhuǎn)運過程使細胞攝取葡萄糖。葡萄糖進入細胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。西藏MEM培養(yǎng)基價格信息減血清培養(yǎng)基提高了細胞培養(yǎng)的重復(fù)性和可靠性。
實驗組和對照組3選用發(fā)酵中期添加琥珀酸,此時,菌體增殖放緩,以產(chǎn)酸為主,琥珀酸對三羧酸循環(huán)有正向促進作用,而對乙醛酸循環(huán)途徑起**作用,從而導(dǎo)致谷氨酸產(chǎn)量的增加;梯度試驗發(fā)現(xiàn),琥珀酸添加量過**于10g/l),并不會對谷氨酸產(chǎn)量帶來進一步的提升,綜合成本考慮,選擇低于10g/l的添加量較為合適。對照組2和實驗組在發(fā)酵中后期添加殼聚糖,能夠改變細胞壁的通透性,促進谷氨酸分泌到胞外,從而提升谷氨酸產(chǎn)量和糖酸轉(zhuǎn)化率;但是殼聚糖添加量(超過100mg/l)過大會導(dǎo)致抑菌現(xiàn)象發(fā)生,進而造成菌株死亡。雖然,上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述,但在本發(fā)明基礎(chǔ)上,可以對之作一些修改或改進,或在實施案例之外的樹種實施本方法,這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此,在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改,改進或范圍的擴大,均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物,含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或**生長活性是達到生理平衡的。此外,血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、*****等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復(fù)雜,批間差異大及存在**等外源污染風(fēng)險,對下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制*行業(yè)的使用也越來越少。因此,基于對血漿成份的分析,合成細胞培養(yǎng)基應(yīng)運而生。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計、配制的培養(yǎng)基。減血清培養(yǎng)基減少了血清中的未知因素對細胞的影響。
培養(yǎng)實例2:蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實例2與培養(yǎng)實例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子,蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期,在適宜條件下培養(yǎng),可以獲得處于各發(fā)育時期的擬南芥無菌***,包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等,其余完全同培養(yǎng)實例1。1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序含有較多花朵,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。對比培養(yǎng)例2:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例2,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達、平均**大蓮座葉長為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長為,花序發(fā)育良好,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。F12培養(yǎng)基在生物醫(yī)學(xué)研究中表現(xiàn)出優(yōu)越的性能。貴州培養(yǎng)基哪家便宜
無血清培養(yǎng)基適合于需要無血清環(huán)境的細胞系。遼寧培養(yǎng)基進貨價
微量元素在細胞內(nèi)通常以與有機物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細胞中參與氧的轉(zhuǎn)運;鈷是維生素B12的組成部分,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細胞內(nèi)具有重要功能的酶,還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能;亞硒酸鈉中的硒,作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基,具有抗過氧化物能力,參與消除細胞內(nèi)的脂肪酸過氧化物,提高細胞的生長速率和活性。在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中,為滿足細胞生長增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,動物細胞對許多物質(zhì)(難溶于水的離子或脂類物質(zhì))的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進細胞生長。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結(jié)合鐵,促進細胞對鐵離子的吸收,并具有***作用,其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關(guān)。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,主要用來刺激細胞增殖,并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物,是腦磷酸的合成前提。遼寧培養(yǎng)基進貨價