另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過(guò)程中會(huì)造成干擾,并且具有一定的固醇類(lèi)***樣作用,如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),可能會(huì)發(fā)生一些固醇類(lèi)反應(yīng)。現(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù),生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外,可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過(guò)改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì),常用的種類(lèi)有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中,隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。天津MEM a培養(yǎng)基進(jìn)貨價(jià)
文獻(xiàn)2“混合硝酸稀土對(duì)谷氨酸產(chǎn)生菌的影響,氨基酸雜志”發(fā)現(xiàn),在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加一定量的稀土元素,能夠提高谷氨酸的產(chǎn)量。申請(qǐng)人之前的**技術(shù)“一種谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基制備方法”,在常規(guī)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn),通過(guò)添加菌體蛋白浸膏來(lái)替代酵母膏氮源,不但節(jié)約了成本,還能提高氨基酸發(fā)酵產(chǎn)率,一舉兩得。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:在已有發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,申請(qǐng)人針對(duì)微生物發(fā)酵的特點(diǎn),繼續(xù)進(jìn)行了改進(jìn),以提高發(fā)酵效率,據(jù)此,提出了一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b;所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加,然后間隔12h以上添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。進(jìn)一步地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖,酵母浸膏,k2hpo4,mgso4·7h2o,2-羥基乙胺,cecl3,mnso4·h2o,feso4·7h2o,vb1,生物素;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph,**,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。進(jìn)一步地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸,尿素,殼聚糖;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph,**,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。推薦地,所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖50-100g/l,酵母浸膏10-30g/l,k2hpo41-5g/l。上海MEM培養(yǎng)基進(jìn)口使用減血清培養(yǎng)基能減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。
第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***;在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中,消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來(lái)微生物污染的前提。(一)術(shù)語(yǔ)消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無(wú)菌(asepsis)是常用術(shù)語(yǔ)。下面就術(shù)語(yǔ)概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。(如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。)(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱(chēng)消毒劑(dis-infectant)。一般而言,消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無(wú)菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱(chēng)無(wú)菌操作。無(wú)菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過(guò)濾等。
微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn);鈷是維生素B12的組成部分,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶,還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能;亞硒酸鈉中的硒,作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的輔基,具有抗過(guò)氧化物能力,參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過(guò)氧化物,提高細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和活性。在低血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中,為滿足細(xì)胞生長(zhǎng)增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類(lèi)、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,動(dòng)物細(xì)胞對(duì)許多物質(zhì)(難溶于水的離子或脂類(lèi)物質(zhì))的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結(jié)合鐵,促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的吸收,并具有***作用,其促生長(zhǎng)作用可能與其具有生長(zhǎng)因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長(zhǎng)因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,主要用來(lái)刺激細(xì)胞增殖,并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物,是腦磷酸的合成前提。減血清培養(yǎng)基提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
無(wú)血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來(lái)問(wèn)題的目的。無(wú)血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),包括以下幾大類(lèi)物質(zhì):1)促貼壁物質(zhì):一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉*細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2)促生長(zhǎng)因子及***:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。***也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些***是許多細(xì)胞必不可少的,如胰島素。3)酶**劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在無(wú)血清培養(yǎng)基中需含酶**劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。無(wú)血清培養(yǎng)基適合于需要無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞系。內(nèi)蒙古DMEM高糖培養(yǎng)基包括
DMEM培養(yǎng)基提供了適宜的pH值和滲透壓。天津MEM a培養(yǎng)基進(jìn)貨價(jià)
參與細(xì)胞的代謝活動(dòng)。此外,通過(guò)提供鈉,K+和Ca2+,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。Na+是細(xì)胞外液中**主要的陽(yáng)離子,對(duì)維持滲透壓的恒定有決定性的作用,還與Cl-共同參與生物電活動(dòng)、維持水平衡和酸堿平衡等。K+主要分布在細(xì)胞內(nèi)液,對(duì)于***某些酶是必需的,并在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的酸堿平衡上也有極重要意義。Ca2+和Mg2+主要參與信號(hào)傳導(dǎo)、能量代謝、脂肪酸合成、核糖體穩(wěn)定和蛋白質(zhì)合成等多種生理作用。PO43-、SO42-、HCO3-是基質(zhì)所需陰離子,同時(shí)是細(xì)胞內(nèi)電荷的調(diào)節(jié)者。磷對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝和調(diào)控都有重要的作用,含磷的化合物如核酸、磷脂、蛋白質(zhì)是構(gòu)成細(xì)胞的主要成分,ATP、ADP是能量生成、存儲(chǔ)和利用的不可或缺的化合物。上述離子對(duì)于細(xì)胞的作用各有不同,它們共同構(gòu)成了細(xì)胞賴(lài)以生存的滲透壓、pH和電化學(xué)平衡的微環(huán)境,細(xì)胞對(duì)于某種元素的吸收利用會(huì)受到其它元素的干擾,例如培養(yǎng)基中過(guò)高的鈣離子濃度會(huì)使鎂和鋅的吸收利用受到干擾。因此,在保證培養(yǎng)基中上述離子濃度滿足要求以外,還需保證上述離子之間種類(lèi)和比例的平衡。此外,微量元素如鐵、鈷、鎳、硒、碘、銅、鋅、錳、鉻、鉬、氟等對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和產(chǎn)物合成都有促進(jìn)作用。天津MEM a培養(yǎng)基進(jìn)貨價(jià)