ph值測定常用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液有哪幾種
ph值測定常用的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液草酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液酒石酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液苯二甲酸氫鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液硼酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液氫氧化鈣標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液在一定程度上能抵抗外加少量酸、堿或稀釋,而保持溶液pH值基本不變的作用稱為緩沖作用。具有緩沖作用的溶液稱為緩沖溶液。緩沖溶液性質(zhì)a.抗酸/堿,抗稀釋作用因為緩沖溶液中具有抗酸成分和抗堿成分,所以加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,其pH值基本上是不變的。稀釋緩沖溶液時,酸和堿的濃度比值不改變,適當(dāng)稀釋不影響其pH值。b.緩沖容量緩沖容量是衡量緩沖溶液緩沖能力大小的尺度。緩沖容量的大小與緩沖組分濃度和緩沖組分的比值有關(guān)。緩沖組分濃度越大,緩沖容量越大;緩沖組分比值為1時,緩沖容量比較大。 酸和鹽濃度等比例增減時,溶液的pH值不變。浙江PBS緩沖液包括什么
從中選取包被抗體濃度和酶標(biāo)抗體的稀釋度。為了進(jìn)一步節(jié)省試劑,可以此濃度為基點,縮小間距再進(jìn)一步做棋盤滴定。?2測定方法的標(biāo)準(zhǔn)化?2.1加樣?????ELISA中除了包被外,一般需進(jìn)行96孔加樣。定性測定中有時不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性。例如規(guī)定為加樣1滴,如不具備相當(dāng)?shù)臈l件,要盡量使用相同口徑的滴管,保持準(zhǔn)確的加樣姿勢,使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中,加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確,**好采用量程準(zhǔn)確的微量移液器。加樣時應(yīng)將液體加在孔底,不要加在孔壁上部,避免出現(xiàn)氣泡。?2.2保溫?????在ELISA中,一般在加標(biāo)本和結(jié)合物后,反應(yīng)的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定的要求,保溫容器**好是水浴箱,可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。如用保溫箱,空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其,以平衡溫度。?2.3洗滌?????洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯一類物質(zhì)即避免非特異性吸附,在ELISA中**為常用。ELISA板的洗滌一般可采用以下方法:吸干孑L內(nèi)反應(yīng)液;將洗滌液注滿板孔;發(fā)表評論請自覺遵守互聯(lián)網(wǎng)相關(guān)的政策法規(guī),嚴(yán)禁發(fā)布***、**、反動的言論。吉林HBSS緩沖液是什么PBS緩沖液中的磷酸鹽和鹽水可以維持實驗體系的離子強(qiáng)度穩(wěn)定。
酶活性實驗中緩沖液的作用在?酶活性實驗中,?緩沖液的主要作用是?維持實驗環(huán)境的pH穩(wěn)定?,為酶提供一個**適的pH環(huán)境,從而確保酶的活性得到**佳發(fā)揮。緩沖液通過其抗酸抗堿能力,對抗溶液中H+濃度的變化,從而對溶液的酸度起到調(diào)節(jié)和控制的作用緩沖液的選擇與作用?提供**適pH值?:緩沖液能夠提供酶所需的**適pH值,這對于酶的活性至關(guān)重要。不同的酶有不同的**適pH值,通過選擇合適的緩沖液可以確保酶在**佳條件下進(jìn)行催化反應(yīng)。?3?維持pH穩(wěn)定?:緩沖液能夠抵抗外來的酸或堿的影響,保持溶液的pH值相對穩(wěn)定,從而確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。這對于酶活性實驗尤為重要,因為酶的活性對pH變化非常敏感。?4?提供金屬離子?:在某些情況下,緩沖液還能提供酶所需的金屬離子或其他必要的離子,進(jìn)一步優(yōu)化酶的反應(yīng)條件。
三、緩沖液使用中的注意事項在實際工作中有些分析人員由于不大了解緩沖溶液的作用機(jī)理,當(dāng)所配制和使用的緩沖溶液與規(guī)定的數(shù)值不相符時,為使緩沖溶液達(dá)到要求,就用鹽酸或氫氧化鈉等強(qiáng)酸、強(qiáng)堿進(jìn)行調(diào)節(jié),以為這樣做可以使緩沖溶液盡快達(dá)到所需要的pH值,然而,結(jié)果卻適得其反,這樣的溶液pH值雖然調(diào)對了,可是它的緩沖體系卻被破壞了,作用也就失去了,緩沖溶液一般都是由弱酸及其弱酸鹽或是弱堿及其弱堿鹽組成的一對共軛體。使用緩沖溶液的注意事項:不少緩沖溶液都含有易揮發(fā)組分,如,氨-氯化銨中的氨酷酸-醋酸鈉中的醋酸。現(xiàn)在,不少實驗室引入了定量加液器,用定量加液器加試劑,具有簡便準(zhǔn)確誤差恒定的特點,特別是在做成批樣品時更顯出它的優(yōu)越性,不少同志也喜歡用它來加緩沖液,但是,應(yīng)注意緩沖液不能長久存放在定量加液器中,因該器皿不密閉,易造成氨的揮發(fā)(醋酸-醋酸鈉緩沖液中的醋酸也同理),從而,導(dǎo)致溶液失效,正確的做法是緩沖液應(yīng)適量配制,使用后及時密閉并置于低溫中保存。緩沖溶液是一種能夠抵抗pH變化的溶液。
所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。3.苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相,因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃,此時的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色,有助于方便識別有機(jī)相。③加入等體積的1MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。④重復(fù)操作步驟③。⑤加入等體積的MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。⑥重復(fù)操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法:1.說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。緩沖液是一種能在加入少量酸或堿時抵抗pH改變的溶液。四川DPBS緩沖液是什么
為什么緩沖溶液可以維持PH值的穩(wěn)定呢?浙江PBS緩沖液包括什么
假設(shè)緩沖溶液里含有弱酸HA以及它的共軛堿。在溶液里發(fā)生的質(zhì)子反應(yīng)為:水合氫離子的濃度取決于弱酸與其共軛堿的濃度比。當(dāng)加入少量強(qiáng)堿時,酸被中和,導(dǎo)致了氫氧根離子在溶液中很少累積,從而的濃度增加,的濃度減少。可以看到,雖然加入了強(qiáng)堿,但是溶液里的氫氧根離子變化很少,同時, 濃度較大,相對的變化小,兩者比值幾乎無變化,因此根據(jù)公式,水合氫離子的濃度變化很小。加入弱酸則是同樣的道理。由于在 大濃度基數(shù)上的微小變化不會改變比值,也因此維持了體系內(nèi)氫離子和氫氧根離子濃度的平衡。 [1]浙江PBS緩沖液包括什么