1、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程，這是什么原因？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。3、為什么使用了胰蛋白酶消化，細(xì)胞還是成團(tuán)的，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)高之后才消化傳代⑤胰酶存儲(chǔ)不當(dāng)，或者使用了過(guò)期胰酶胰酶PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。福建進(jìn)口胰酶介紹

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介產(chǎn)品簡(jiǎn)介：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價(jià)格C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml碧云天生產(chǎn)的胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含。該消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾**，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些**的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn)，通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。包裝清單：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml―說(shuō)明書(shū)1份保存條件：4℃保存，一年有效。注意事項(xiàng)：在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被**污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。為了您的安全和**，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。使用說(shuō)明使用說(shuō)明：1.貼壁細(xì)胞的消化：a)吸去培養(yǎng)液，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。b)加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。c)顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。d)如果發(fā)現(xiàn)消化不足。云南EDTA胰酶介紹消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化。

    6.磷酸酶EDTA相對(duì)不溶。可以用磁力攪拌器攪拌，或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中，溶解后過(guò)濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶，節(jié)省時(shí)間和過(guò)濾器。使用時(shí)，請(qǐng)對(duì)PBS消毒。8.將儲(chǔ)存溶液儲(chǔ)存在-20°C的冰箱中，然后將溶液儲(chǔ)存在4°C。使用時(shí)，請(qǐng)勿將其放在27°C的水浴中，因?yàn)檫@會(huì)使自由基酶迅速無(wú)法使用。使用前放置一次。是的，因?yàn)樘砑拥臄?shù)量很少，因此通常不會(huì)凍結(jié)細(xì)胞。9.在消化過(guò)程中，向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后，立即搖動(dòng)培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿，用負(fù)壓吸引多余的胰酶排出，將其加入37度培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化。10.請(qǐng)注意，過(guò)量的胰酶對(duì)細(xì)胞有害，而過(guò)量的EDTA也會(huì)影響粘附，因此無(wú)需將細(xì)胞浸入血漿酶中進(jìn)行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用，并具有在37度以下消化的能力。在消化過(guò)程中，甚至不需要將一些易于消化的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中。請(qǐng)注意，它不能消化太長(zhǎng)時(shí)間。四、實(shí)驗(yàn)所需試劑清單：序列產(chǎn)品名貨號(hào)CAS備注11000ul藍(lán)吸頭FT-10002氫氧化鈉JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合樹(shù)脂chelex100SS6072以上為EDTA-胰蛋白酶的配制，實(shí)驗(yàn)請(qǐng)選用高質(zhì)量試劑。

胰酶和雙抗怎么保存？

胰酶和雙抗怎么保存？

胰酶和雙抗怎么保存？

雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年。由于該試劑在4°C下長(zhǎng)期存放是不穩(wěn)定的，分裝后在-20°C下避光保存。青霉素在2-8°C存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)4天，鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn)，在2-8°C可以存放30天左右。雙抗從凍融后基本成分已開(kāi)始降解。胰酶的保存：胰酶可在-20°C下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20°C冰箱取出。盡量避免在4C長(zhǎng)期保存。 胰酶的使用濃度是多少？

胰酶操作步驟：

(*供參考) ：1. 吸取培養(yǎng)基，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以除去殘余的血清。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過(guò)細(xì)胞即可。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘。（不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同）3. 顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。4. 此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。 消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的？福建進(jìn)口胰酶介紹

胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換。福建進(jìn)口胰酶介紹

    先用少許**過(guò)的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾**，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過(guò)濾**，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫Ｓ脻舛葹榛?。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。）一般**，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜，取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高，就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō)，四度放置過(guò)夜，給**生長(zhǎng)的機(jī)會(huì)，盡管過(guò)濾可以出去**，可是出不掉其代謝產(chǎn)物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因，考慮有：1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性2、溶液ph值不對(duì)3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正?，F(xiàn)象，因胰酶多取自動(dòng)物胰腺，沉淀為**塊。福建進(jìn)口胰酶介紹