空心圓圈)，原型抗體okt3的ed50為130ng/ml(圖8，實心圓)，說明目標(biāo)細胞t細胞對acd3-sh更加敏感。同時，在飽和抗體濃度下，acd3-sh的**大擴增信號也明顯強于okt3的。結(jié)果顯示，改造抗體acd3-sh明顯具有更高的激發(fā)t細胞擴增的活力。培養(yǎng)實例2nkt細胞培養(yǎng)及抗人cd3抗體的擴增活力檢測本測試分別用改造實例3中獲得的改造抗體acd3-sh和其原型抗體okt3來刺激人pbmc中nkt細胞(cd3+cd56+)的增殖，通過對細胞計數(shù)來比較活力。材料人靜脈血，基礎(chǔ)培養(yǎng)基gt-t551(takara，wk551t)，擴增培養(yǎng)基(gt-t551，il-21000iu/ml)，細胞培養(yǎng)瓶t75(corning，430720)/t175(corning，431080)，ifn-γ(上海凱茂，注射用重組人干擾素γ伽瑪)。細胞培養(yǎng)和檢測方法利用白細胞分離液分離人pbmc細胞，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至2e6/ml，置于培養(yǎng)瓶內(nèi)。在37℃、5％co2培養(yǎng)2小時，以使單核細胞貼壁。收集懸浮細胞，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度至1e6/ml。加入重組人ifn-γ(1000iu/ml)。在37℃、5％co2培養(yǎng)24小時。加入抗人cd3抗體(30ng/ml)和il-2(1000iu/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。按照1:1體積比例添加擴增培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時。之后每隔48小時取樣計數(shù)，用擴增培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至，繼續(xù)培養(yǎng)。1640培養(yǎng)基有助于細胞在體外保持正常功能。湖北F12細胞培養(yǎng)基供應(yīng)商

    SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細胞、BHK21細胞和CHO細胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細胞，在*苗生產(chǎn)中可以達到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，易使細胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對細胞有不良影響，易產(chǎn)生細胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率。獲取同樣的細胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細胞，在本實驗情況下12代內(nèi)細胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實踐證明效果良好。采DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基添加1％小牛血清在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)CHO細胞生產(chǎn)EOP，可提高收液次數(shù)，每次收液表達量明顯提高。無血清細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)DMEM培養(yǎng)基常用于神經(jīng)細胞的體外培養(yǎng)。

    sptrpleuasnglylysglu0tyrlyscyslysvalserasnlysalaleuaspserproileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleu0aspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys4213prt人工序列(artificialsequence)4aspileglnleuthrglnserproal**lemetseralaserprogly151015glulysvalthrmetthrcysargalaserserservalsertyrmet202530asntrptyrglnglnlysserglythrserprolysargtrpiletyr354045aspthrserlysvalalaserglyvalprotyrargpheserglyser505560glyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthr859095pheglyalaglythrlysleugluileasnargthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnserglnglu0servalthrgluglnaspserlysaspserthrt。

    這些重組蛋白和動物來源成分對生物制品的安全性有很大影響。成本低。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細胞、BHK21細胞和CHO細胞，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風(fēng)險，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶、3L轉(zhuǎn)瓶、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細胞，在*苗生產(chǎn)中可以達到低血清高密度的培養(yǎng)效果。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，易使細胞增殖迅速，代謝旺盛，代謝產(chǎn)物對細胞有不良影響，易產(chǎn)生細胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù)，增加傳代頻率。獲取同樣的細胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，可提高生產(chǎn)效率。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細胞，在本實驗情況下12代內(nèi)細胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實踐證明效果良好。采DMEM。1640培養(yǎng)基提高了實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

    552851)、apc-cy7mouseanti-human-cd16(bdbiosciences，557758)、pemouseanti-human-cd56(bdbiosciences，555516)進行流式細胞檢測。結(jié)果討論試驗組擴增獲得的細胞中cd3-cd56+的nk細胞占比為％(圖10a)，高于對照組獲得的％(圖10b)。在這群細胞中，cd3-cd16+cd56+的nk細胞占比分別是％(圖10c)和％(圖10d)。那么，在總細胞群中，利用試驗組擴增獲得的cd3-cd16+cd56+的nk細胞可達到總細胞的％，優(yōu)于用對照組獲得的％。結(jié)果顯示，利用試驗組抗體獲得的nk細胞產(chǎn)品的純度更高。三、細胞產(chǎn)品應(yīng)用應(yīng)用實例1nk細胞產(chǎn)品對腫*細胞的體外殺傷活力檢測本測試用培養(yǎng)實例3中的試驗組擴增獲得的nk細胞產(chǎn)品(試驗組)和對照組擴增獲得的nk細胞產(chǎn)品(對照組)分別對淋巴*細胞系raji、乳腺*細胞系bt-474、乳腺*細胞系mcf7進行直接殺傷和adcc殺傷試驗，通過對終產(chǎn)品活力分析來比較改造抗體和原型抗體的活力。材料：raji細胞(atcc，ccl-86)，bt-474細胞(atcc，crl-3247)，mcf7細胞(atcc，htb-22)，檢測試劑盒cytotoxnon-radioactivecytoto***cityassay(promega，g1780)，培養(yǎng)基rpmi1640(thermofisher，11879020)，利妥昔單抗ritu***mab，曲妥珠單抗trastuzumab。檢測方法傳代培養(yǎng)腫*細胞。DMEM高糖培養(yǎng)基提供了細胞所需的豐富營養(yǎng)。無血清細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)

1640培養(yǎng)基能夠有效支持細胞的持續(xù)分裂。湖北F12細胞培養(yǎng)基供應(yīng)商

    spectramaxm5microplatereaders)上讀取490nm吸收光值。殺傷率計算公式如下：殺傷比例＝(殺傷試驗信號–效應(yīng)細胞自發(fā)釋放信號–靶細胞自發(fā)釋放信號)/(靶細胞**大釋放信號–靶細胞自發(fā)釋放信號)×100％結(jié)果討論對raji細胞的殺傷試驗結(jié)果如圖11所示?？梢钥吹剑琻k細胞對raji細胞在e/t＝1:1時已有基礎(chǔ)直接殺傷，但兩組的殺傷率相差不大。在加入ritu***mab后，nk細胞被***，試驗組nk的殺傷率從％提升到％。對照組nk同樣也被***，但*從％提升至％，與試驗組的有明顯差距。adcc殺傷是特異性的，在加入trastuzumab時，nk細胞不會被***，兩組nk細胞在這種條件下的直接殺傷率相差不大。對bt-474和mcf7細胞的殺傷試驗結(jié)果如圖12和圖13所示?？梢钥吹?，試驗組nk細胞對bt-474細胞的殺傷率與對照組的相比，無論是直接殺傷還是adcc殺傷，都明顯占優(yōu)。同樣，試驗組nk細胞對mcf7細胞的殺傷率與對照組的相比，無論是直接殺傷還是adcc殺傷，都明顯占優(yōu)。應(yīng)用實例2nk細胞產(chǎn)品對腫*細胞的動物體內(nèi)直接殺傷活力檢測本測試用培養(yǎng)實例3中的試驗組擴增獲得的nk細胞產(chǎn)品在小鼠raji-luc血液*模型上進行體內(nèi)殺傷試驗，來確定nk細胞的體內(nèi)活力。材料nsg小鼠(6-8周齡)，raji-luc細胞。湖北F12細胞培養(yǎng)基供應(yīng)商