培養(yǎng)實(shí)例2:蘭茲貝格型擬南芥無(wú)菌植株培養(yǎng)培養(yǎng)實(shí)例2與培養(yǎng)實(shí)例1不同的地方在于:步驟(1)所用種子為蘭茲貝格(ler,landsbergerecta)型擬南芥種子,蘭茲貝格擬南芥較哥倫比亞擬南芥具有更早的花期,在適宜條件下培養(yǎng),可以獲得處于各發(fā)育時(shí)期的擬南芥無(wú)菌***,包括根、胚軸、葉柄、子葉、蓮座葉、莖、花、角果等,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例1。1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2cs生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達(dá)、平均**大蓮座葉長(zhǎng)為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長(zhǎng)為,花序含有較多花朵,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。對(duì)比培養(yǎng)例2:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例2,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為:蘭茲貝格型擬南芥種子在1/2ms生長(zhǎng)培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)28d的幼苗,表現(xiàn)為植株健壯、平均株高為,蓮座葉發(fā)達(dá)、平均**大蓮座葉長(zhǎng)為,葉色濃綠,根系粗壯、平均主根長(zhǎng)為,花序發(fā)育良好,花粉形態(tài)和活力均正常、平均有活力的花粉為%。如圖2所示。無(wú)血清培養(yǎng)基有助于維持細(xì)胞的純凈生長(zhǎng)環(huán)境。中國(guó)香港減血清培養(yǎng)基報(bào)價(jià)
CD3-CD56+:50%-90%NK細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基制劑制備過(guò)程中,需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行3次清洗,在大量的實(shí)驗(yàn)中會(huì)發(fā)現(xiàn),在清洗細(xì)胞的過(guò)程中往往會(huì)損失大量細(xì)胞,少則30%多則50%。友康研**細(xì)胞回收液干細(xì)胞溫和消化酶專門用于干細(xì)胞的消化,包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,胚胎干細(xì)胞(ES)等。消化作用其溫和,對(duì)細(xì)胞的干細(xì)胞溫和消化酶(500mL/瓶)T細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基可用于Car-T細(xì)胞的培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)可不添加任何自體血漿。T細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基用于HEK293細(xì)胞的培養(yǎng)及重組蛋白的表達(dá),HEK293蛋白表達(dá)無(wú)血清培養(yǎng)基成分明確,比較大細(xì)胞密度可達(dá)7×10E6cells/mHEK293蛋白表達(dá)無(wú)血清培養(yǎng)基GMP級(jí)細(xì)胞凍存液不含蛋白、不含DMSO,化學(xué)成分明確。是可作為細(xì)胞*物*用輔料的凍存液。GMP級(jí)細(xì)胞凍存液友康生物免*細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基(CIK),用于單核細(xì)胞向CIK細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及體外大規(guī)模擴(kuò)增培養(yǎng)。免*細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基用于懸浮HEK293細(xì)胞(如293T、293S、293F、293A等)的連續(xù)培養(yǎng)以及外源基因的瞬時(shí)表達(dá),尤其在包裝慢**過(guò)程中表HEK293全懸浮無(wú)血清培養(yǎng)基CHO無(wú)血清培養(yǎng)基,無(wú)血清,低蛋白;采用批次培養(yǎng),CHO比較大生長(zhǎng)密度可達(dá)9E6cells/mL。新疆無(wú)血清培養(yǎng)基一般多少錢F12培養(yǎng)基適用于多種類型的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn);鈷是維生素B12的組成部分,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶,還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能;亞硒酸鈉中的硒,作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的輔基,具有抗過(guò)氧化物能力,參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過(guò)氧化物,提高細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和活性。在低血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中,為滿足細(xì)胞生長(zhǎng)增殖需要,常常添加一些成份:蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用,動(dòng)物細(xì)胞對(duì)許多物質(zhì)(難溶于水的離子或脂類物質(zhì))的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用,如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,能夠結(jié)合鐵,促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的吸收,并具有***作用,其促生長(zhǎng)作用可能與其具有生長(zhǎng)因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長(zhǎng)因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,主要用來(lái)刺激細(xì)胞增殖,并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物,是腦磷酸的合成前提。
愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。對(duì)比培養(yǎng)例6:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例6,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)15-18d的葉片略微增厚,在葉片四周產(chǎn)生較少的淡綠色愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為90%,在愈傷**團(tuán)塊上產(chǎn)生的嫩綠色不定芽數(shù)量較少;本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)9-11d在切口處產(chǎn)生大量淡黃色致密的愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實(shí)例6和對(duì)比培養(yǎng)例6的誘導(dǎo)結(jié)果比較:用上述方法進(jìn)行本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基愈傷**誘導(dǎo)率為100%,而ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率*為90%,在所述相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基可更快誘導(dǎo)出大量致密的葉片愈傷**、產(chǎn)生更多的不定芽;用上述方法進(jìn)行本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的根愈傷**形態(tài)相近,兩種培養(yǎng)基的根愈傷**誘導(dǎo)率均為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實(shí)例7:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)(1)水稻種子消毒及篩選:a、選種:以秈稻縉恢10號(hào)為例,將水稻種子晾曬干燥后于4℃下長(zhǎng)期保存,挑選籽粒飽滿、大小基本一致的水稻種子,用剪刀從種子中部剪開,去除谷殼。MEM培養(yǎng)基含有多種必需的營(yíng)養(yǎng)成分。
無(wú)血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來(lái)問(wèn)題的目的。無(wú)血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),包括以下幾大類物質(zhì):1)促貼壁物質(zhì):一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉*細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2)促生長(zhǎng)因子及***:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。***也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些***是許多細(xì)胞必不可少的,如胰島素。3)酶**劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在無(wú)血清培養(yǎng)基中需含酶**劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。MEM培養(yǎng)基適合多種類型的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。中國(guó)香港減血清培養(yǎng)基報(bào)價(jià)
MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分。中國(guó)香港減血清培養(yǎng)基報(bào)價(jià)
但酚紅在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來(lái)胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細(xì)胞生長(zhǎng)。碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說(shuō)明中的碳酸氫鈉推薦量是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)、安全量,是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)所得。但是由于不同的細(xì)胞系(株)不同,同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同(細(xì)胞耐受性不同等),且存在的地域性水質(zhì)差異等,在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中也可稍作改動(dòng),但使用者需做相應(yīng)的檢測(cè)(理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗(yàn)等)。HEPES是一種非離子緩沖液,在pH~,在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能**。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25mmol/L。**酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是在沒有葡萄糖的條件下,細(xì)胞也可以代謝**酸鈉。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好單獨(dú)配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。中國(guó)香港減血清培養(yǎng)基報(bào)價(jià)