對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2,增加消化效力胰酶可在-20℃下保存一年。江西重組胰酶價(jià)格
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。黑龍江進(jìn)口胰酶聯(lián)系方式胰酶用0.05%還是0.25%的?需不需要含酚紅的?
先用少許**過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜,過(guò)濾**,分裝,4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過(guò)濾**,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度為或。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。)一般**,至于作用效果,需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜,取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō),四度放置過(guò)夜,給**生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),盡管過(guò)濾可以出去**,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性2、溶液ph值不對(duì)3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正?,F(xiàn)象,因胰酶多取自動(dòng)物胰腺,沉淀為**塊。
0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題。胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異?商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,在運(yùn)輸過(guò)程中,胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的時(shí)候,溶液呈淡紅色;PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn)。使用胰酶細(xì)胞消化液(不含EDTA)的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來(lái)分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過(guò)程它可以被看成一種簡(jiǎn)單的動(dòng)力學(xué)過(guò)程,它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),然后這些留下的物質(zhì)可以用來(lái)維持細(xì)胞的高能量水平這種過(guò)程通過(guò)將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來(lái)發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,通常有四種類型,它們是肽酶,脂水解酶,載脂蛋白酶和糖水解酶,分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子,以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì),維持其自身的正常功能和形態(tài)。EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。黑龍江進(jìn)口胰酶聯(lián)系方式
胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用?江西重組胰酶價(jià)格
乙二胺四乙酸:(EDTA)是一種有機(jī)化合物,常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候,需要有Ca或Mg離子的參與,EDTA與他們結(jié)合后,導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低,再加上胰蛋白酶的消化作用,使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用。難消化的細(xì)胞,胰酶中可填加EDTA。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,但消化時(shí)必須要用,那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,可離心棄上清,再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響,那么可不離心。江西重組胰酶價(jià)格