1、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢?胰酶的作用是什么?胰酶是一種蛋白酶,酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,通過(guò)在特定位置上降解蛋白,使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時(shí),細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,這是什么原因?血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制,就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,細(xì)胞還是成團(tuán)的,這可能是什么原因?qū)е碌??①消化時(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)高之后才消化傳代⑤胰酶存儲(chǔ)不當(dāng),或者使用了過(guò)期胰酶含EDTA的胰酶消化活力會(huì)比不含EDTA的強(qiáng)。EDTA胰酶價(jià)格對(duì)比
細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶生物制品簡(jiǎn)介中文名稱:胰蛋白酶中文同義詞:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(豬胰臟);胰蛋白酶1:300(豬胰臟);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類英文名稱:Trypsin英文同義詞:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS號(hào):9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS號(hào):232-650-8胰蛋白酶物化性質(zhì)胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結(jié)晶,再制成的凍干制劑。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有機(jī)溶劑。在,短時(shí)間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀,Ca2+有保護(hù)和***作用,胰蛋白酶的等電點(diǎn)為。牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成,含6對(duì)二硫鍵,其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下,酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解,釋放出來(lái)纈-天-天-天-天-賴6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè),分子量23800[2],活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸殘基排列順序中,只有41個(gè)氨基酸殘基不同。EDTA胰酶價(jià)格對(duì)比消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學(xué)詞條編寫(xiě)與應(yīng)用工作項(xiàng)目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動(dòng)物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性**強(qiáng)的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。中文名胰蛋白酶英文名Trypsin別稱胰酶化學(xué)式C6H15O12P3分子量≈24000CAS登錄號(hào)9002-07-7EINECS登錄號(hào)232-650-8[1]熔點(diǎn)115℃[1]水溶性易溶外觀白色或類白色目錄1生物制品簡(jiǎn)介?物化性質(zhì)2*典標(biāo)準(zhǔn)?來(lái)源含量?制法要求?性狀?鑒別?檢查?效價(jià)測(cè)定?制劑3胰蛋白酶的醫(yī)學(xué)檢查?檢查名稱?分類?胰蛋白酶的測(cè)定原理?試劑?操作方法?正常值?化驗(yàn)結(jié)果臨床意義?附注?相關(guān)疾病4生物*品說(shuō)明?*理作用?適應(yīng)證?禁忌證?用法用量?注意事項(xiàng)?不良反應(yīng):?**點(diǎn)評(píng)5其他。
胰蛋白酶(Trypsin)簡(jiǎn)稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,偏酸性時(shí)呈橘紅色,近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無(wú)酚紅指示劑,經(jīng)0.22μm過(guò)濾除菌。胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。
胰蛋白酶試劑同酶速率法測(cè)定。胰蛋白酶操作方法同酶速率法測(cè)定。胰蛋白酶正常值(1)RIA法:陰性。(2)酶速率法(37℃):十二指腸液:150~600μg/ml胰蛋白酶化驗(yàn)結(jié)果臨床意義(1)升高:急性胰腺、慢性胰腺(復(fù)發(fā)期)、胰腺*、腎功能不全等。(2)降低:胰腺外分泌功能不全(慢性胰腺后期)。胰蛋白酶附注急性胰腺時(shí)血清胰蛋白酶可上升至正常人的2~400倍,一般在10~15天**正常。胰蛋白酶相關(guān)疾病急性胰腺、慢性胰腺、胰腺*[4]胰蛋白酶生物*品說(shuō)明胰蛋白酶*理作用胰蛋白酶為肽鏈內(nèi)切酶,對(duì)精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用,可使天然蛋白、變性蛋白、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸。由于血清中含有非特異性抑肽酶,故胰蛋白酶不會(huì)消化正常**,而能分解黏痰、膿性痰等黏性分泌物,能促進(jìn)***、化療*物向病灶滲透。胰蛋白酶適應(yīng)證1.用于膿胸、血胸、外科癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷、婁管等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫、膿腫。2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和膿性痰。3.用于***毒蛇咬傷,曾試用于竹葉青、銀環(huán)蛇、眼鏡蛇、蝮蛇等毒蛇咬傷的各型病人800余例,均獲***。胰蛋白酶禁忌證1.肝腎出血、出血傾向及結(jié)核性膿腫患者禁用。2.不可用于急性癥及出血空腔中。胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn)。山東進(jìn)口胰酶常見(jiàn)問(wèn)題
胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。EDTA胰酶價(jià)格對(duì)比
在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液)以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),破壞細(xì)胞間的連接,從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在PH 8.0和37℃時(shí),胰酶的作用能力**強(qiáng),因此使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用,以增強(qiáng)解離效果。EDTA胰酶價(jià)格對(duì)比