收藏查看我的收藏0有用+1已投票0胰蛋白酶編輯鎖定本詞條由“科普**”百科科學詞條編寫與應用工作項目審核。胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性**強的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。中文名胰蛋白酶英文名Trypsin別稱胰酶化學式C6H15O12P3分子量≈24000CAS登錄號9002-07-7EINECS登錄號232-650-8[1]熔點115℃[1]水溶性易溶外觀白色或類白色目錄1生物制品簡介?物化性質(zhì)2*典標準?來源含量?制法要求?性狀?鑒別?檢查?效價測定?制劑3胰蛋白酶的醫(yī)學檢查?檢查名稱?分類?胰蛋白酶的測定原理?試劑?操作方法?正常值?化驗結(jié)果臨床意義?附注?相關疾病4生物*品說明?*理作用?適應證?禁忌證?用法用量?注意事項?不良反應:?**點評5其他。胰酶PH值6.8左右時呈淡黃色。甘肅重組胰酶有哪些
先用少許**過的PBS調(diào)成糊狀,然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,過濾**,分裝,4℃保存?zhèn)溆谩#?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(左右)調(diào)成糊狀,然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾**,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度為或。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。)一般**,至于作用效果,需要消化一次細胞感覺一下,因為不同廠家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過夜,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒有必要四度過夜。從理論上來說,四度放置過夜,給**生長的機會,盡管過濾可以出去**,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:1、過期或是酶已經(jīng)部分變性2、溶液ph值不對3、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正?,F(xiàn)象,因胰酶多取自動物胰腺,沉淀為**塊。吉林胰酶供應商家變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離,請放心使用。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?能,對于胰酶呈黃色的問題,不同品牌也都對此現(xiàn)象進行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離,請放心使用。細胞消化時,胰酶不去除對細胞的影響?細胞消化時,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比較好去除。EDTA是一種化學螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要徹底清洗去除,否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存
一、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗簡介:EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需的EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。它通常與胰蛋白酶結(jié)合使用。原因是鈣和鎂等金屬離子會降低胰酶的活性,因此在使用胰蛋白酶消化液時應添加EDTA。它可以螯合這些離子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需材料及試劑:PBS,氫氧化鈉,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗步驟:1.磷酸酶的質(zhì)量/體積比為%,即將。注意,盡量不要用水溶解,因為必須保持滲透壓。%%,可根據(jù)細胞消化的難度進行調(diào)整。不需要EDTA,可以省略易于消化的細胞。EDTA對細胞粘附有影響,因此應大量使用。如果影響粘附,則必須將其用于消化,在用完全培養(yǎng)基終止消化后,離心并棄去上清液,然后添加完全培養(yǎng)基以進行培養(yǎng)以除去EDTA。如果不影響附著力,則不要離心。。用磷酸酶稀釋PBS。4.請注意,血清可以阻止血漿酶的作用,但不能阻止EDTA。對于某些細胞,有必要在消化后停止離心。5.當pH約為8時,磷酸酶和EDTA**易溶解。在制備過程中,您可以先滴幾滴氫氧化鈉以將pH調(diào)整為8。請注意,磷酸酶會使溶液變酸,因此您應隨時溶解時測量pH值。調(diào)整。請注意,不應添加過量的氫氧化鈉,否則電池將無法承受堿的作用。為什么收到的胰酶會有顏色差異?
細胞消化胰酶的配制對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對難消化的細胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2+,增加消化效力胰酶是一種復合消化酶制劑。中國澳門胰酶生產(chǎn)企業(yè)
0.25%胰酶消化液(含有EDTA,含酚紅)pH值為7.2-7.8。甘肅重組胰酶有哪些
1、細胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢?胰酶的作用是什么?胰酶是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細胞,在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程,這是什么原因?血清終止的原理其實是競爭抑制,就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,使胰酶失去消化細胞蛋白的機會。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,細胞還是成團的,這可能是什么原因?qū)е碌??①消化時間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當,或者使用了過期胰酶甘肅重組胰酶有哪些