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青海胰酶聯(lián)系方式

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-30

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異?商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,在運(yùn)輸過程中,胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的時(shí)候,溶液呈淡紅色;PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn)。消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。青海胰酶聯(lián)系方式

青海胰酶聯(lián)系方式,胰酶

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶,屬于絲氨酸蛋白酶家族,不僅可以水解堿性氨基酸(精氨酸或賴氨酸)羧基端的肽鍵,還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取,經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶,再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸,分子量為23800道爾頓,活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水,不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,**適pH值范圍在7.8~8.5左右,pH值大于9.0時(shí)不可逆失活。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用。[1]內(nèi)蒙古胰酶牌子在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。

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胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽進(jìn)而分解為氨基酸,其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成,不含 EDTA,經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。該溶液濃度較高,可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用。

胰酶中的酚紅有哪些作用?酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑,中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。研究表明:酚紅可以模擬固醇類***(特別是雌***)的作用。為避免固醇類反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8、在做細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí),細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化?Annexin V(膜聯(lián)蛋白)是Ca2+依賴的蛋白,EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V,進(jìn)而影響結(jié)果,因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化,時(shí)間可以長(zhǎng)一點(diǎn)。隨時(shí)觀察細(xì)胞情況,避免消化過度;也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下,后用***吹勻,比消化簡(jiǎn)單,還可避免使用胰酶帶來的傷害。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。

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    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,就是說,盡量不要用水來溶,因?yàn)橐3譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是-,根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的,容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁,但消化時(shí)必須要用,那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,可離心棄上清,再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響,那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意,血清可終止胰酶的作用,但不能終止EDTA的作用,對(duì)有些細(xì)胞來說,終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解,在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,注意,胰酶可使溶液變酸,所以要邊溶邊測(cè)pH,隨時(shí)調(diào)整。注意,不可加過量NaOH,否則過堿,細(xì)胞會(huì)受不了。6、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,可用磁力攪拌器,或放入4度冰箱過夜,待溶解后過濾除菌。7、可配2-3乘的胰酶,這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲(chǔ)存液放在-20度冰箱凍存,使用液放在4度,用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,使用前放在室溫下一會(huì),因?yàn)榧拥牧亢苌?,所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞。9、消化時(shí)。 胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運(yùn)輸。青海胰酶聯(lián)系方式

EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。青海胰酶聯(lián)系方式

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么?胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰4鏁r(shí)體積會(huì)膨脹,多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全?注意:不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙狀移動(dòng)就可以了,就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化?它的消化效果與哪些有關(guān)呢?胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。青海胰酶聯(lián)系方式