對(duì)于大多數(shù)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞，滲透壓在260～320mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細(xì)胞培養(yǎng)基的過程中，滲透壓的測(cè)定較為重要，有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯(cuò)誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞過程，在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控，防止?jié)B透壓過高對(duì)細(xì)胞的損害。溫度溫度對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基有較大的影響，溫度過高可引起營(yíng)養(yǎng)成份的降解或破壞，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH、離子強(qiáng)度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細(xì)胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺，在高溫條件下降解的速度較快，如35℃貯存時(shí)，放置3天降解25%左右，在4℃貯存3周降解約20%。粘滯性及表面張力含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的，在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液的粘滯性對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒有多大影響；但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對(duì)細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用，尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時(shí)，攪拌和通氣都會(huì)引起泡沫的產(chǎn)生。對(duì)于含血清培養(yǎng)液，由于血清中多種蛋白的存在，攪拌時(shí)產(chǎn)生的氣泡較多，氣泡的上升運(yùn)動(dòng)對(duì)細(xì)胞的損傷程度還有爭(zhēng)議，但氣泡的破裂對(duì)細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷。F12培養(yǎng)基在細(xì)胞分化和基因表達(dá)研究中有重要應(yīng)用。云南RPMI1640培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)

    5）微量元素：硒是**常見的。①無蛋白無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（proteinfreemidium,PFM）這類培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來源蛋白，但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段，以及類固醇***和脂類前體等，以替代動(dòng)物***、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒有蛋白或蛋白含量極低，有利于生物制品的分離純化。④化學(xué)組份限定無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Chemicallydefinedmedia,CDM）此類培養(yǎng)基是目前**安全、**為理想的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基，所有成份的濃度都完全明確，即使其所添加的少量蛋白，也是可經(jīng)過純化處理，成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性，提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性，并有效降低了純化成本。嚴(yán)格意義上來說，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類之列，其具體是指一類根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基，主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品安全性和降低血清的使用等。個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基可能是無血清培養(yǎng)基，也可能是低血清培養(yǎng)基，**終是為滿足某一種或某一類生物制品的生產(chǎn)需求。2.培養(yǎng)基的基本組分細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。云南RPMI1640培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)無血清培養(yǎng)基適合于無血清環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。

    已發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的血清濃度減少時(shí)，這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下，這些成分也可幫助細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長(zhǎng)。***和生長(zhǎng)因子在大多數(shù)常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒有注明，但在無血清培養(yǎng)基中通常要加入它們，用其來代替血清中的***能增加多種不同類型細(xì)胞的貼瓶率；生長(zhǎng)因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等，生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子有著***的特異性，一般與***或其它物質(zhì)起相互協(xié)同或加成作用。另一種常見的添加物就是血清替代物，目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產(chǎn)品，其穩(wěn)定性較好，但批次間仍有差別，產(chǎn)品的成分也不很確定。干粉培養(yǎng)基原倍液的配制1）配制過濾**的細(xì)胞培養(yǎng)基(1)閱讀培養(yǎng)基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、**酸鈉、HEPES等）。(2)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。(3)加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。(4)輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。(6)用μm濾膜正壓過濾**。。

    若應(yīng)用于植物培養(yǎng)中的液體培養(yǎng)基制作，可不用調(diào)節(jié)ph，用超純水(ph為)充分溶解后定容，便可直接應(yīng)用于大多數(shù)植物水培。培養(yǎng)實(shí)例1：哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)(1)種子保存及消毒方法：a、擬南芥種子保存方法：哥倫比亞(col,columbia)型擬南芥種子成熟后，收取種子于，加入3-8顆變色**干燥劑，用封口膜密封后置于4℃長(zhǎng)期保存；b、擬南芥種子**消毒方法：取出經(jīng)低溫干燥保存的種子，于無菌環(huán)境下，將適量種子置于無菌，加入適量體積的無菌水，將離心管顛倒幾次后用低速離心機(jī)離心10s，小心倒掉上清，重復(fù)3次；加入75％酒精，將離心管顛倒幾次后用低速離心機(jī)離心10s，小心倒掉上清；用無菌水清洗3次，低速離心10s后去除上清；加入適量體積的5％naclo溶液，將離心管上下顛倒10-20次，低速離心10s后倒掉上清，重復(fù)2次；用無菌水清洗3次，低速離心10s后去除上清；加入無菌水，使種子完全浸泡在無菌水中，于4℃放置48h后播種。在種子質(zhì)量良好的情況下，利用上述方法保存及消毒的無菌擬南芥種子，萌發(fā)率極高且?guī)缀跬瑫r(shí)出苗。(2)生長(zhǎng)培養(yǎng)基配制：1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l，用超純水溶解，。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。MEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

    此法由巴斯德創(chuàng)立，用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種：一種為℃加熱15秒，另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用第一種方法。(2)煮沸法。在1個(gè)大氣壓下，水煮沸后溫度達(dá)100℃，煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉，可將其沸點(diǎn)提高至105℃，既可促進(jìn)芽胞的殺滅，又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法，常用附諾(Amold)流通蒸氣**器，利用1個(gè)大氣壓下100℃水蒸氣進(jìn)行消毒，10-30分鐘后**繁殖體被殺死，但對(duì)芽孢作用不大。(4)間歇**法（fractionalsterilization）。采用間歇方式達(dá)到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內(nèi)，100℃加熱15-30分鐘，每日1次，連續(xù)3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過夜，致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再通過流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復(fù)，既可殺滅芽胞，又可使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。若某些物質(zhì)不耐100攝氏度，則可將溫度下降至75-80℃，每次加熱時(shí)間延長(zhǎng)到30-60分鐘，常用血清凝固器對(duì)呂氏血清培養(yǎng)基和L-J培養(yǎng)基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave)，在蒸氣不外溢的條件下，使鍋內(nèi)壓力增高，隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。F12培養(yǎng)基在細(xì)胞分化研究中表現(xiàn)優(yōu)越。吉林F12培養(yǎng)基價(jià)目表

減血清培養(yǎng)基減少了血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的干擾。云南RPMI1640培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)

    無血清培養(yǎng)基，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份，達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求，又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉*細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2）促生長(zhǎng)因子及***：針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。***也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì)，有些***是許多細(xì)胞必不可少的，如胰島素。3）酶**劑：培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶**劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。**常用的是大豆胰酶**劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。云南RPMI1640培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)