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廣東重組胰酶

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-11-27

    胰蛋白酶:(Trypsin)為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化(如雞胚原代成纖維細(xì)胞)可用胰酶進(jìn)行消化,可以不加EDTA。 胰酶可在-20℃下保存一年。廣東重組胰酶

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    胰蛋白酶用法用量1.每次~5mg,用蒸餾水5~10ml溶解。2.一般應(yīng)用:1次5000單位,每日1次肌注,用量酌情而定。為防止疼痛,可加適量普魯卡因。局部用*視情而定,可配成溶液制劑(~,微堿性時(shí)活性**強(qiáng))、噴霧劑、粉劑、油膏等,用作體腔內(nèi)注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。3.治蛇毒:取注射用結(jié)晶胰蛋白酶2000單位1~3支,加~(或注射用水)4~20ml稀釋,以牙痕為中心,在傷口周圍作浸潤(rùn)注射,或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1~2次。如病情需要可重復(fù)使用。若傷肢腫脹明顯,可于注射本品30分鐘后,切開傷口排毒減壓(嚴(yán)重出血者例外),也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛,可用其***胰蛋白酶注意事項(xiàng)1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗(yàn),應(yīng)注意可能產(chǎn)生過敏反應(yīng)。2.吸取注射液后應(yīng)另?yè)Q針頭,以免注射時(shí)疼痛。3.外用時(shí),可采用注射用制劑以緩沖液溶解,但必須在3小時(shí)內(nèi)用畢。胰蛋白酶不良反應(yīng):1.注射局部疼痛、硬結(jié)。2.本品可引起組胺釋放,產(chǎn)生全身反應(yīng),有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、***、頭暈、胸痛、***、皮疹、血管神經(jīng)性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細(xì)胞減少等。癥狀輕時(shí)不影響繼續(xù)***,給予抗組胺*和對(duì)癥*物即可控制,嚴(yán)重時(shí)應(yīng)即停*。3.本品偶可致過敏性休克。廣東重組胰酶EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。

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0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。

胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。

胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng),胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存。胰酶使用的時(shí)候要注意什么?(1)在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。(2)胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。

    在253nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié),使吸光度在~,作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量,加~60胰蛋白酶單位的溶液。測(cè)定法取底物溶液,加μl,混勻,作為空白。另取供試品溶液200μl,加底物溶液(恒溫于℃±℃),立即計(jì)時(shí),混勻,使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃,照紫外-可見分光光度法(2010年版*典二部附錄ⅣA),在253nm的波長(zhǎng)處,每隔30秒鐘讀取吸光度,共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo),時(shí)間為橫坐標(biāo),作圖;每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在~,呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求,應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度,再作測(cè)定。在上述吸光度對(duì)時(shí)間的關(guān)系圖中,取成直線部分的吸光度,按下式計(jì)算:式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量,單位;A1為直線上終止的吸光度;A2為直線上開始的吸光度;T為A1至A2讀數(shù)的時(shí)間,分;W為測(cè)定液中含供試品的量,mg;,吸光度每分鐘改變,即相當(dāng)于1個(gè)胰蛋白酶單位。胰蛋白酶制劑注射用胰蛋白酶[3]胰蛋白酶胰蛋白酶的醫(yī)學(xué)檢查胰蛋白酶檢查名稱胰蛋白酶胰蛋白酶分類血液生化檢查>酶類測(cè)定胰蛋白酶胰蛋白酶的測(cè)定原理同酶速率法測(cè)定。胰蛋白酶消化液都由已經(jīng)過豬細(xì)小病毒檢測(cè)和支原體檢測(cè)的原料制備。

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    一、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介:EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)所需的EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。它通常與胰蛋白酶結(jié)合使用。原因是鈣和鎂等金屬離子會(huì)降低胰酶的活性,因此在使用胰蛋白酶消化液時(shí)應(yīng)添加EDTA。它可以螯合這些離子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)所需材料及試劑:PBS,氫氧化鈉,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)步驟:1.磷酸酶的質(zhì)量/體積比為%,即將。注意,盡量不要用水溶解,因?yàn)楸仨毐3譂B透壓。%%,可根據(jù)細(xì)胞消化的難度進(jìn)行調(diào)整。不需要EDTA,可以省略易于消化的細(xì)胞。EDTA對(duì)細(xì)胞粘附有影響,因此應(yīng)大量使用。如果影響粘附,則必須將其用于消化,在用完全培養(yǎng)基終止消化后,離心并棄去上清液,然后添加完全培養(yǎng)基以進(jìn)行培養(yǎng)以除去EDTA。如果不影響附著力,則不要離心。。用磷酸酶稀釋PBS。4.請(qǐng)注意,血清可以阻止血漿酶的作用,但不能阻止EDTA。對(duì)于某些細(xì)胞,有必要在消化后停止離心。5.當(dāng)pH約為8時(shí),磷酸酶和EDTA**易溶解。在制備過程中,您可以先滴幾滴氫氧化鈉以將pH調(diào)整為8。請(qǐng)注意,磷酸酶會(huì)使溶液變酸,因此您應(yīng)隨時(shí)溶解時(shí)測(cè)量pH值。調(diào)整。請(qǐng)注意,不應(yīng)添加過量的氫氧化鈉,否則電池將無法承受堿的作用。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。黑龍江進(jìn)口胰酶報(bào)價(jià)

消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。廣東重組胰酶

    (含)英文名:(含)儲(chǔ)存條件:-20℃產(chǎn)品簡(jiǎn)介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽,進(jìn)而分解為氨基酸,其**適溫度約為37℃。胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()由、除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說明(*供參考):1.貼壁細(xì)胞的消化①吸除培養(yǎng)液,用無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,去除殘余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液(),略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置。(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()重新消化。⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落。 廣東重組胰酶