胰酶使用注意:1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。胰酶配制方法:1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對細胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值(①胰酶(1:250)②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時,調(diào),過濾除菌。)3、pbs(:稱取胰酶粉末,先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀,然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,過濾滅菌,分裝,4℃保存?zhèn)溆谩#?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液()調(diào)成糊狀,然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度為。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至。)一般,至于作用效果,需要消化一次細胞感覺一下,因為不同廠家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過夜,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高。 培養(yǎng)細胞時,胰酶和雙抗該怎么用?天津重組胰酶哪個好
(含)英文名:(含)儲存條件:-20℃產(chǎn)品簡介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質(zhì)水解為肽,進而分解為氨基酸,其**適溫度約為37℃。胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()由、除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化大多數(shù)貼壁細胞。使用說明(*供參考):1.貼壁細胞的消化①吸除培養(yǎng)液,用無菌PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,去除殘余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液(),略蓋過細胞即可,室溫放置。(不同的細胞消化時間有所不同)③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用***吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()重新消化。⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落。 遼寧胰酶價格信息有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑。
EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,就是說,盡量不要用水來溶,因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是-,根據(jù)細胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的,容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響,因此使用時要甚重。如果影響貼壁,但消化時必須要用,那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,可離心棄上清,再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),可去除EDTA。如果對貼壁沒影響,那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意,血清可終止胰酶的作用,但不能終止EDTA的作用,對有些細胞來說,終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解,在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,注意,胰酶可使溶液變酸,所以要邊溶邊測pH,隨時調(diào)整。注意,不可加過量NaOH,否則過堿,細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶,可用磁力攪拌器,或放入4度冰箱過夜,待溶解后過濾除菌。7、可配2-3乘的胰酶,這樣比較節(jié)約時間和濾器,用的時候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲存液放在-20度冰箱凍存,使用液放在4度,用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴,因為這樣會讓胰酶很快失效,使用前放在室溫下一會,因為加的量很少,所以一般不會凍壞細胞。9、消化時。
常用的消化酶有:胰酶:用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)干細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。膠原酶:膠原酶是比較少用的,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下干細胞。這種方法作用溫和,對干細胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細胞的消化的關(guān)鍵因素之一,如果配的比較標準,消化的時候就容易消化,反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下,如果干細胞下來的比較多了,這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清,胰酶遇到血清就會自動終止消化,但這樣操作對干細胞是有一定的影響的。對于容易消化的干細胞,加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶,先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將干細胞消化單細胞。胰蛋白酶可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。
胰酶分裝凍存時要注意什么?胰酶分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹,多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全?注意:不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙狀移動就可以了,就應該停止消化。6、胰酶適用于哪些細胞消化?它的消化效果與哪些有關(guān)呢?胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶是一種異源蛋白酶,與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細胞膜上的蛋白質(zhì)。海南重組胰酶代理商
EDTA是一種化學螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細胞分離。天津重組胰酶哪個好
細胞消化胰酶的配制對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,Trypsin)配方:100mlPBS,0.25g胰酶步驟:1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中,低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,分裝,-20℃保存,4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,機械攪拌對酶是一種沖擊,如果起沫,酶就變性了。低溫,防止酶失活對難消化的細胞:在上述配方中,加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2+,增加消化效力天津重組胰酶哪個好