一般酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有比較大吸收,當(dāng)pH值降為L 0時,比較大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數(shù)變大,顯色加深,因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。河南酶標(biāo)儀質(zhì)保
TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有比較大消光系數(shù),如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長,有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時,有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定,故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。重慶全自動酶標(biāo)儀高清觸屏K3 Plus酶標(biāo)儀的通用內(nèi)置軟件允許采用終點(diǎn)法及動力學(xué)讀取模式。
盡管酶標(biāo)儀的發(fā)展極為快速,種類繁多,功能也不斷加強(qiáng),但其*根本的功用是不變的,即比色測定。大凡比色測定,其基本要求就是在一定吸光度范圍內(nèi)要有好的測定準(zhǔn)確性、線性和精密性。同樣的吸光度范圍,測定的準(zhǔn)確性、線性和精密性越好則酶標(biāo)儀亦越佳。而且,由于用于酶標(biāo)儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重復(fù)性,則測定速度也是一個較重要的性能指標(biāo)。至于其他如震板、溫育及有關(guān)的軟件功能,則可根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室的需要去比較選擇。光柵型濾光系統(tǒng)具有使用方便,可以進(jìn)行光譜掃描,靈活性等優(yōu)點(diǎn)。
酶標(biāo)儀檢測單位用OD值表示, OD是光密度的意思,表示被檢測物吸收掉的光密度。河南酶標(biāo)儀質(zhì)保
合適的軟件功能對于ELISA定量測定同樣很重要。有研究表明,四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線,*為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此,如目的是定量測定,則在酶標(biāo)儀的軟件功能中,要有這種曲線回歸方程計(jì)算分析功能。其他諸如連點(diǎn)、直線等回歸計(jì)算,則可根據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類回歸計(jì)算就很有必要。此外,酶標(biāo)儀兼做酶標(biāo)動力學(xué)、凝集反應(yīng)測定所需的軟件是否應(yīng)具備,當(dāng)然也應(yīng)根據(jù)使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴,酶標(biāo)儀常另外單獨(dú)按需配備,如果不是實(shí)驗(yàn)室特殊需要,就不必強(qiáng)求這種軟件功能。河南酶標(biāo)儀質(zhì)保
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