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Cas9核酸酶是一種向?qū)NA(guideRNA,gRNA)引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶,可催化雙鏈DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造,它在N端包含一個(gè)核定位信號(NLS),在C端包含一個(gè)EGFP和一個(gè)6X(His)序列。當(dāng)Cas9以NLS序列表達(dá)時(shí),Cas9RNP復(fù)合物在進(jìn)入細(xì)胞后立即定位到細(xì)胞核。不需要體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯,提高了效率。此外,與其他系統(tǒng)相比,EGFP標(biāo)簽可作為追蹤或分類轉(zhuǎn)染細(xì)胞的報(bào)告器,通過熒光細(xì)胞分選(FACS)富集所需基因組編輯的細(xì)胞群。它降低了在基因組編輯應(yīng)用中與單細(xì)胞克隆和基因分型相關(guān)的人工和成本。產(chǎn)品特點(diǎn)如下:無DNA:沒有外部DNA添加;高切割效率:NLS確保Cas9蛋白高效進(jìn)入細(xì)胞核;低脫靶效應(yīng):Cas9核酸酶的瞬時(shí)表達(dá)提高了切割的特異性;節(jié)省時(shí)間:無需轉(zhuǎn)錄和翻譯;減少勞動力:通過基于EGFP的FACS富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。C端His標(biāo)簽增加了融合蛋白檢測方法的選擇??蓱?yīng)用于:通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。通過電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時(shí)的體內(nèi)基因編輯。通過基于EGFP的FACS富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。儲存條件-25~-15℃保存,有效期1年。IdeS Protease全稱免疫球蛋白G降解酶是由人類致病菌釀膿鏈球菌產(chǎn)生并分泌至胞外的一種半胱氨酸水解酶。Recombinant Human FGF-17
Enterokinase,Recombinant,ExpressedinE.coli大腸桿菌表達(dá)重組腸激酶(不帶標(biāo)簽)注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品所講述的緩沖體系需要自行配置。2.不建議37℃條件下酶切,可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。3.在>200mM咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切會受到影響。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,為獲得理想的酶切結(jié)果,請先將樣品透析到25mMTris-HCl8.0緩沖液中,然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn);若不方便透析,可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進(jìn)行酶切,酶的用量與蛋白比例不變;若干擾因素很多,且不便去除,需要適當(dāng)增加酶量或延長酶切時(shí)間,有助于得到理想的酶切效果。4.磷酸鹽對Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會嚴(yán)重影響Enterokinase的活性,因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。5.本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去。后續(xù)如需去除重組腸激酶,可用陰離子交換樹脂(如DEAE-FF)對其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下:平衡緩沖液:25mMTris-HClpH8.0洗脫緩沖液:25mMTris-HClpH8.0,含100mMNaCl6.蛋白酶切效果不好,可適當(dāng)增加酶量,或適當(dāng)延長酶切時(shí)間。Recombinant Mouse MADCAM1 Protein,His Tag透明質(zhì)酸的衍生物可以作為基因傳遞的載體,或用于疫苗佐劑,增強(qiáng)反應(yīng)。
3C樣蛋白酶(3CLpro)或主要蛋白酶(Mpro),正式名稱為C30內(nèi)肽酶或3-胰凝乳蛋白酶樣蛋白酶,[2]是在冠狀病毒中發(fā)現(xiàn)的主要蛋白酶。它在11個(gè)保守位點(diǎn)切割冠狀病毒多蛋白。它是一種半胱氨酸蛋白酶,是蛋白酶PA家族的成員。它在其活性位點(diǎn)具有半胱氨酸-組氨酸催化二聯(lián)體并裂解Gln–(Ser/Ala/Gly)肽鍵。酶委員會將這個(gè)家族稱為SARS冠狀病毒主要蛋白酶(Mpro;EC3.4.22.69)。3CL蛋白酶對應(yīng)于冠狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5(nsp5)。通用名中的“3C”指的是3C蛋白酶(3Cpro),是一種在小核糖核酸病毒中發(fā)現(xiàn)的同源蛋白酶。3C樣蛋白酶能夠催化裂解P1位谷氨酰胺和P1'位小氨基酸(絲氨酸、丙氨酸或甘氨酸)之間的肽鍵。例如,SARS冠狀病毒3CLpro可以自我切割以下肽:[3][4][5]TSAVLQ-SGFRK-NH2和SGVTFQ-GKFKK是對應(yīng)于SARS3C樣蛋白酶的兩個(gè)自切割位點(diǎn)的兩個(gè)肽該蛋白酶在冠狀病毒復(fù)制酶多蛋白(P0C6U8)的加工過程中很重要。它是冠狀病毒中的主要蛋白酶,對應(yīng)于非結(jié)構(gòu)蛋白5(nsp5)。[6]它在11個(gè)保守位點(diǎn)切割冠狀病毒多蛋白。3CL蛋白酶在其活性位點(diǎn)具有半胱氨酸-組氨酸催化二元組。[4]半胱氨酸的硫作為親核試劑,組氨酸的咪唑環(huán)作為一般堿基。
糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲存條件-25~-15℃保存,有效期1年。使用方法1、變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,冰上冷卻,離心10秒;加入2μL的Buffer2、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,總反應(yīng)體積20μL;加入1-2μL的PNGase,輕輕混勻。在37℃孵育1-3h。2、非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化:1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入2~5μL的PNGaseF,輕輕混勻。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時(shí)間。注意事項(xiàng)1.PNGaseF建議搭配我司提供的配套緩沖液使用,按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足,可咨詢當(dāng)?shù)劁N售進(jìn)行購買FGF-18與FGF R2C,F(xiàn)GF R3C以及高爾基蛋白GLG1結(jié)合,并誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞。
RecombinantBiotinylatedHumanENPP-3Protein,His-AviTag性能參數(shù)分子別名(Synonyms)NPP3;E-NPP3;PD-Ibeta表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)(Source)BiotinylatedHumanENPP-3ProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheN-Terminus.ItcontainsLeu48-Ile875.[Accession|O14638]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof99.97kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto110-130kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.純度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制劑(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重構(gòu)方法(Reconstitution)Centrifugethetubebeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.儲存條件Theproductshouldbestoredat-25~-15℃for1yearfromdateofreceipt.2-7days,2~8°Cundersterileconditionsafterreconstitution.3-6months,-85~-65℃understerileconditionsafterreconstitution.CX3CL1用作粘附分子,而兩種形式都是表達(dá)CX3CR1的靶細(xì)胞的化學(xué)吸引力。Somatostatin 28 (1-14)
在蛋白質(zhì)表達(dá)體系中,腸激酶常用于切割融合標(biāo)簽,從而釋放出目的蛋白,特別是在pET表達(dá)系統(tǒng)中。Recombinant Human FGF-17
抑肽酶(Aprotinin),一種絲氨酸蛋白酶抑制劑,廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。本研究探討了利用大腸桿菌(E. coli)表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組抑肽酶的方法,及其在科研和工業(yè)生產(chǎn)中的優(yōu)勢。引言抑肽酶,又稱胰蛋白酶抑制劑,是一種小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等絲氨酸蛋白酶的活性。在生物制藥、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)研究中,抑肽酶的使用對于防止非特異性蛋白水解至關(guān)重要。傳統(tǒng)的抑肽酶主要來源于動物,如牛肺,但存在外源病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此,利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組抑肽酶的生產(chǎn),可以提供一種無動物源、高純度、質(zhì)量穩(wěn)定的替代品。材料與方法基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建:人源Ⅲ型膠原蛋白基因被克隆并構(gòu)建到適合大腸桿菌表達(dá)的質(zhì)粒載體中。大腸桿菌表達(dá)菌株的構(gòu)建:通過轉(zhuǎn)化,將構(gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌宿主菌中,構(gòu)建表達(dá)菌株。發(fā)酵培養(yǎng):利用發(fā)酵罐進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng),以提升重組抑肽酶的產(chǎn)量。蛋白純化:通過多次柱純化獲得高純度的重組抑肽酶。Recombinant Human FGF-17