BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)在PCR中的應(yīng)用具有多個優(yōu)勢,以下是一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性,這使得它非常適合于等溫擴(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)。在這些技術(shù)中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地擴(kuò)增模板,在10到30分鐘內(nèi)將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴(kuò)增至可以檢出的水平。2.**高溫穩(wěn)定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它在一些需要高溫反應(yīng)的實驗條件下表現(xiàn)出色。3.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫擴(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度,能夠?qū)⑽⒘亢怂崮0鍞U(kuò)增到可檢測水平。同時,它也具有高特異性,減少了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險。4.**簡化的樣品處理**:BsuDNAPolymerase可以直接對復(fù)雜樣品進(jìn)行擴(kuò)增,無需事先進(jìn)行復(fù)雜的核酸純化和提取步驟,節(jié)省了時間和成本。5.**可擴(kuò)增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不僅可以擴(kuò)增DNA,還可以直接擴(kuò)增RNA,省去了額外的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(cDNA合成)步驟,這對于RNA的檢測和分析更加方便快捷。6.**無核酸外切酶和RNase殘留**:BsuDNAPolymerase在生產(chǎn)過程中確保無核酸外切酶、切口酶及RNase殘留,這有助于提高實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標(biāo)記。EGFRvIII peptide (PEPvIII)
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息:來源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,適合用于抗污染的等溫擴(kuò)增反應(yīng),如LAMP和CPA等。應(yīng)用:主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)和其他等溫擴(kuò)增技術(shù)。規(guī)格:活性定義:1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式:提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),貨號14402ES,以及凍干粉形式的產(chǎn)品,貨號14405ES,不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度,低至5copies目的基因可測,且在飛克(fg)級別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下,該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應(yīng)長達(dá)5天,并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲存條件:建議在-25℃至-15℃下儲存,以保持產(chǎn)品活性,并避免反復(fù)凍融。Recombinant Cynomolgus TNFR2/CD120b/TNFR1B Protein,His TagFnCas12a包含約1300個氨基酸,含有RuvC-like結(jié)構(gòu)域,同時具有DNA和RNA內(nèi)切酶的活性。
Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR產(chǎn)物的克隆中主要應(yīng)用在以下幾個方面:1.**單鏈DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸,底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,因此可以用來消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,從而生成單鏈DNA,這對于某些克隆技術(shù)來說是必要的步驟。2.**PCR產(chǎn)物的克隆**:-在克隆過程中,有時需要將PCR產(chǎn)物的5'端磷酸化,以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,從而在一定程度上幫助準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物。3.**減少自身環(huán)化和非特異性連接**:-在連接反應(yīng)中,為了減少質(zhì)粒載體的自身環(huán)化,可以使用堿性磷酸酶處理質(zhì)粒DNA以去除5'磷酸基團(tuán)。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情況下,它可以輔助減少PCR產(chǎn)物的自身環(huán)化,尤其是在PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)中。4.**提高克隆效率**:-通過消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產(chǎn)物的非特異性連接,從而提高克隆的效率和準(zhǔn)確性。綜上所述,Lambda核酸外切酶在PCR產(chǎn)物的克隆中主要通過生成單鏈DNA、準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物、減少自身環(huán)化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發(fā)揮作用。
DNA片段大小對磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的回收率有影響。根據(jù)搜索結(jié)果,我們可以得出以下結(jié)論:1.**小片段DNA(小于200bp)**:對于小于200bp的DNA片段,回收率會下降。這是因為小片段的DNA與固相基質(zhì)的結(jié)合力相對較弱,因此相對損失較大,導(dǎo)致回收率降低。在某些情況下,小于100bp的DNA片段的回收率可能只有30-60%。2.**中等大小片段DNA(200bp-4kb)**:在這個范圍內(nèi)的DNA片段,通?;厥章瘦^高,可以達(dá)到80-95%。這是因為這些片段大小適中,既不會因太小而損失,也不會因太大而難以洗脫。3.**大片段DNA(大于4kb)**:對于大于4kb的DNA片段,回收率也會下降,通常在30-50%之間。這是因為大片段的DNA與固相基質(zhì)的結(jié)合力更強(qiáng),因此更難洗脫。4.**片段大小與回收率的關(guān)系**:DNA片段越大,和固相基質(zhì)的結(jié)合力越強(qiáng),就越難洗脫,回收率就越低。相反,DNA的量越少,相對損失越大,回收率也越低。5.**操作技巧**:為了提高回收率,可以采取一些操作技巧,比如減少切膠體積、確保溶膠徹底、使用合適的洗脫液體積和pH值等。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**技術(shù)原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過在冰上進(jìn)行簡短的消化反應(yīng),在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題,如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡化了操作步驟,使用磁珠固定細(xì)胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測序文庫的時間(1-2天)。3.**背景信號和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產(chǎn)生的背景信號可能較高,因為它可能涉及到非特異性的DNA切割。
去泛素化酶可以去除泛素化標(biāo)記,這一步驟是泛素化過程的逆轉(zhuǎn)過程,它允許細(xì)胞對泛素化事件進(jìn)行精細(xì)調(diào)控。EGFRvIII peptide (PEPvIII)
耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶,具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**來源與表達(dá)**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達(dá)純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**病毒純化、疫苗生產(chǎn)**:作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級別,提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)**:有效防止細(xì)胞和疫苗研究中外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)團(tuán)。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**:-分子量:24.7kDa。-等電點(diǎn):9.61。-純度:≥99%。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃)。-輔助因子:1-10mMMg2+。5.**儲存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲存于緩沖液(25mMTris-HCl,5mMMgCl2,500mMNaCl,50%Glycerol,pH7.5)中,無色透明液體。干冰運(yùn)輸,-15℃~-25℃保存,有效期2年。EGFRvIII peptide (PEPvIII)