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快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

來源: 發(fā)布時間:2023-01-14

慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的慢病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝載體同時共轉(zhuǎn)染293細胞或其衍生細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的慢病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,通過純化濃縮進一步提供慢病毒滴度,即可以直接用于宿主細胞的gan ran。目的基因進入到宿主細胞之后,經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應(yīng)分子。加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率??焖俾《巨D(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

LentiBOOST是德國Sirion Biotech開發(fā)的一種高效、無細胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。它是一種非離子型、非受體依賴性的表面活性劑,通過降低細胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運,促進慢病毒與細胞膜的融合,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,且對細胞分化和植入無影響。LentiBOOST在對人T細胞無細胞毒作用的情況下可增強慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細胞,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細胞仍能分泌TNF及IFN-γ,并對抗原陽性的腫瘤細胞具有明顯的細胞毒作用,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略。提高慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

SIRION Biotech成立于2005年,旨在領(lǐng)導(dǎo)下一代病毒載體技術(shù),用于基因和細胞zhi liao以及疫苗開發(fā)?,F(xiàn)在,SIRION提供了一個基于慢病毒、腺病毒和類腺病毒的quan mian的病毒載體技術(shù)平臺,加速了基因zhi liao研究和藥物開發(fā)。SIRION正成為這一增長領(lǐng)域的優(yōu)先合作伙伴。從早期臨床階段I/II到晚期臨床階段III的臨床試驗中使用了LentBoost并證明了在改善zhi liao載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的臨床成功。德國 Sirion Biotech 公司研發(fā)了 LentiBOOST 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑,專為提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)難轉(zhuǎn)的哺乳動物和嚙齒動物細胞的效率。LentiBOOST 是一種無細胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑,用于臨床前和臨床應(yīng)用。作為一種普遍作用的(受體非依賴型)佐劑,可應(yīng)用于多種臨床相關(guān)細胞類型,CD34+造血干細胞(HSCs)、原代 T 細胞和 NK 細胞等,對難轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠 T 細胞亦有效。LentiBOOST 已成為改進體外 (ex vivo) 基因zhi liao和 CAR-T 細胞zhi liao的臨床轉(zhuǎn)導(dǎo)方案的選擇。

人間充質(zhì)干細胞(MSCs)的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長期轉(zhuǎn)基因表達,并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來巨大希望。Polybrene是實驗室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,但它未被批準用于人體,并且還被證明會損害MSCs細胞的增殖和分化。因此,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗是非常有必要的。LentiBOOST和硫酸魚精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標準生產(chǎn),且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,并且曾被用于人類CD34+HSCs細胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。這里,我們研究了這些試劑用于脂肪來源MSC細胞的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增qiang xiao果。我們發(fā)現(xiàn)LentiBOOST和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生與polybrene相當甚至更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且對細胞活力或干細胞特性沒有劑量依賴性的不良影響。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑的組合dai biao了一種有價值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中MSCs慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力。可以用什么做慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)?

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

目前,CAR-T細胞主要通過病毒載體制備,大多數(shù)情況下由慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒做載體。慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進靶細胞基因組,穩(wěn)定的基因表達等特點,被認為是Zui有希望的基因zhi liao載體。與其他病毒載體相比,慢病毒載體的整合模式具有更低的致Ai風險,以及隨機整合基因風險低,因此,用慢病毒載體生產(chǎn)CAR-T細胞更加安全有效,而且靈活。更重要的是慢病毒相較于其他病毒載體,生產(chǎn)成本相對較低。另外,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細胞,也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細胞,因此,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)更為guang fan的細胞,包括那些難轉(zhuǎn)導(dǎo)的血液前體細胞,神經(jīng)細胞,淋巴細胞和巨噬細胞。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)有臨床案例嗎?NK細胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑

新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,稱為原病毒??焖俾《巨D(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過與細胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,且對細胞分化和植入無影響。LentiBOOST在對人T細胞無細胞毒作用的情況下可增強慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細胞,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細胞仍能分泌TNF及IFN-γ,并對抗原陽性的腫瘤細胞具有明顯的細胞毒作用,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略??焖俾《巨D(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

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