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自動(dòng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)技巧

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-08

SIRION Biotech成立于2005年,旨在領(lǐng)導(dǎo)下一代病毒載體技術(shù),用于基因和細(xì)胞zhi liao以及疫苗開發(fā)。現(xiàn)在,SIRION提供了一個(gè)基于慢病毒、腺病毒和類腺病毒的quan mian的病毒載體技術(shù)平臺(tái),加速了基因zhi liao研究和藥物開發(fā)。SIRION正成為這一增長(zhǎng)領(lǐng)域的優(yōu)先合作伙伴。從早期臨床階段I/II到晚期臨床階段III的臨床試驗(yàn)中使用了LentBoost并證明了在改善zhi liao載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的臨床成功。德國(guó) Sirion Biotech 公司研發(fā)了 LentiBOOST 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,專為提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)難轉(zhuǎn)的哺乳動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的效率。LentiBOOST 是一種無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床應(yīng)用。作為一種普遍作用的(受體非依賴型)佐劑,可應(yīng)用于多種臨床相關(guān)細(xì)胞類型,CD34+造血干細(xì)胞(HSCs)、原代 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞等,對(duì)難轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠 T 細(xì)胞亦有效。LentiBOOST 已成為改進(jìn)體外 (ex vivo) 基因zhi liao和 CAR-T 細(xì)胞zhi liao的臨床轉(zhuǎn)導(dǎo)方案的選擇。慢病毒轉(zhuǎn)染有什么限制?自動(dòng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)技巧

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研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且對(duì)細(xì)胞活力或干細(xì)胞特性沒有劑量依賴性的不良影響。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的組合dai biao了一種有價(jià)值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力。細(xì)胞狀態(tài)對(duì)于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也具有很大的影響,良好的生長(zhǎng)狀態(tài)是達(dá)到高gan ran效率的保證,一般選擇細(xì)胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行g(shù)an ran可提高gan ran效率。詳述慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑什么增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率?

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影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)是gan ran復(fù)數(shù)(MOI),MOI指的是每個(gè)細(xì)胞gan ran的病毒粒子個(gè)數(shù),病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示。慢病毒的gan ran能力隨細(xì)胞類型的不同而不同,因此每種不同的細(xì)胞類型需要不同的MOI。MOI值越大,慢病毒gan ran上的可能性也越大,gan ran效率越高,但對(duì)細(xì)胞的毒性也越大。另外細(xì)胞需要的MOI值越大,也說明細(xì)胞越難被轉(zhuǎn)導(dǎo)。慢病毒gan ran時(shí)間也相當(dāng)重要,gan ran后換液太早會(huì)導(dǎo)致gan ran效率下降;gan ran后換液太晚,則對(duì)細(xì)胞的損傷太大,效率也不高。一般在gan ran后24h換液,如果慢病毒對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的毒性,可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及時(shí)提前換液。

慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。在gan ran能力方面可有效地gan ran神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,從而達(dá)到良好的的基因zhi liao效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能da da提高目的基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率da da增加,能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因的長(zhǎng)期、穩(wěn)定表達(dá)。慢病毒載體的研究發(fā)展。

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LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。人間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs) 的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長(zhǎng)期轉(zhuǎn)基因表達(dá),并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來巨大希望。Polybrene是實(shí)驗(yàn)室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,但它未被批準(zhǔn)用于人體,并且還被證明會(huì)損害MSCs細(xì)胞的增殖和分化。因此,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)是非常有必要的。LentiBOOST是德國(guó)Sirion Biotech開發(fā)的一種高效、無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。國(guó)內(nèi)有賣慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的公司。制備慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)生產(chǎn)系統(tǒng)

哪種試劑可以幫助增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)染?自動(dòng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)技巧

di yi代慢病毒載體以Naldini以及Kafri[2]構(gòu)建的三質(zhì)粒系統(tǒng)為dai biao。該載體系統(tǒng)由包裝質(zhì)粒、包膜質(zhì)粒及載體質(zhì)粒3種質(zhì)粒組成。將包膜蛋白單獨(dú)置于一個(gè)質(zhì)粒中進(jìn)行表達(dá),包裝載體含有除包膜蛋白編碼基因的全病毒基因組,使用CMV啟動(dòng)子進(jìn)行表達(dá),并用人胰島素基因的polyA替代3’LTR作為加尾信號(hào),同時(shí)將外源插入片段以及所有相關(guān)順式作用元件置于外源表達(dá)載體中。第二代慢病毒載體系統(tǒng)是在di yi代基礎(chǔ)上改進(jìn)的,在包裝質(zhì)粒中刪去了HIV的所有附屬基因vif、vpu、vpr和nef,以減少產(chǎn)生RCR的風(fēng)險(xiǎn)。這些附屬基因的去除并不影響病毒的滴度和轉(zhuǎn)染能力,同時(shí)增加了載體的安全性。自動(dòng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)技巧

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司擁有生物醫(yī)藥科技(人體干細(xì)胞、基因診斷與zhiliao技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用除外)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、自有技術(shù)轉(zhuǎn)讓,并提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和技術(shù)服務(wù);計(jì)算機(jī)軟件的開發(fā)、設(shè)計(jì)、制作(音像制品、電子出版物除外)、銷售自產(chǎn)產(chǎn)品;實(shí)驗(yàn)室試劑及耗材(藥品、危險(xiǎn)品除外)、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用baozha物、易制毒化學(xué)品)、儀器儀表、機(jī)械設(shè)備、電子設(shè)備、塑料制品、玻璃制品、辦公用品、電子產(chǎn)品的批發(fā)、進(jìn)出口、傭金代理(拍賣除外)?!疽婪毥?jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】等多項(xiàng)業(yè)務(wù),主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無(wú)線標(biāo)簽機(jī)。一批專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),是實(shí)現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ),是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。誠(chéng)實(shí)、守信是對(duì)企業(yè)的經(jīng)營(yíng)要求,也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無(wú)線標(biāo)簽機(jī)。一直以來公司堅(jiān)持以客戶為中心、血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無(wú)線標(biāo)簽機(jī)市場(chǎng)為導(dǎo)向,重信譽(yù),保質(zhì)量,想客戶之所想,急用戶之所急,全力以赴滿足客戶的一切需要。