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MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

來源: 發(fā)布時間:2023-11-15

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注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物!低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,生命科學領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢,曼博生物嚴格篩選國際創(chuàng)新且經(jīng)過同行驗證過的產(chǎn)品和技術(shù),引入中國市場,開發(fā)、孵育和推廣,致力于將全球創(chuàng)新產(chǎn)品和前沿技術(shù)帶入中國,集中在為細胞/基因領(lǐng)域、/免疫,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化。

上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物!Polysciences 是一家化學品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學家揭示未知領(lǐng)域。 PEI轉(zhuǎn)染試劑在使用時出現(xiàn)沉淀的原因是什么?

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對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因呢?支鏈PEI轉(zhuǎn)染試劑

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線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案