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貼壁細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

來源: 發(fā)布時間:2024-03-11

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化;以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn),以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),分享研發(fā)工具進步帶來的技術(shù)紅利,終為細胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個生命科學(xué)行業(yè)賦能!更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,歡迎咨詢上海曼博生物。???如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?PEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少?貼壁細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

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1、細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!工業(yè)用途PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異使用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例是多少?

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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。?如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?中國地區(qū)代理Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑的是誰?

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產(chǎn)品簡介Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度。經(jīng)過嚴格的性能檢測,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比高?天津PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適用于CHO細胞轉(zhuǎn)染

PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢?貼壁細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?貼壁細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝試用