表達HLA-A2的EndoC-βH5-HLA-A2系是通過每105細胞使用100ngp24衣殼蛋白與pTRIPDU3CMVHLA-A2IRESPURO慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)EndoC-βH5來產(chǎn)生的。在1mg/ml嘌呤霉素存在下將細胞擴增三周以選擇轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞。為了完全成熟，將EndoC-βH5和EndoC-βH5-HLA-A2細胞再培養(yǎng)3周，并用5mM他莫昔芬和0.5mM更昔洛韋處理，以切除永生化基因并選擇切除的細胞。使用胰蛋白酶（25300e054）收集所得細胞，表達EndoC-βH5細胞的修飾HLA-A2引發(fā)同種異體反應(yīng)性T淋巴細胞ji huo，概括了1型糖尿病中涉及的一些自身免疫機制。糖尿病細胞模型EndoC-BH5 細胞作為模型來在基因組篩選中鑒定胰島素分泌調(diào)節(jié)劑。人源胰島B細胞糖尿病細胞模型無菌環(huán)境操作

EndoC-βH5GLTx、EndoC-βH5HLA-A2、EndoC-βH5等細胞可在體外在葡萄糖劑量刺激下產(chǎn)生正常的胰島素分泌反應(yīng)，對GLP-1R/GLP-1等胰島素刺激因子產(chǎn)生正常響應(yīng)，可以響應(yīng)細胞因子刺激，表達HLA-A2等T細胞受體，因此可用于糖尿病炎癥相關(guān)等多種藥物開發(fā)實驗。EndoC-BH5細胞可批量穩(wěn)定生產(chǎn)，因此可以進行基于siRNA的高通量篩選研究中，用于鑒定出潛在的2型糖尿病藥物靶點。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細胞，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上（左圖），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)（右圖），對GLP-1R激動劑， Exendin4刺激產(chǎn)生明細那反饋， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。糖尿病細胞模型法國生物醫(yī)學(xué)局批準糖尿病細胞模型人B細胞系，用慢病毒載體整合了SV40大T抗原 (SV40-LT) 和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT) 兩種轉(zhuǎn)基因。

HumanCellDesign構(gòu)建了EndoC-BH1、EndoC-BH3、EndoC-βH5、GLTxEndoC-βH5、HLA-A2EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良，獲得的功能胰腺B細胞，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上，在2.8mM和11mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應(yīng)，對GLP-1R激動劑、Exendin-4刺激產(chǎn)生明顯增強，且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應(yīng)。此外，HumanCellDesign開發(fā)系列人源胰島B細胞模型EndoC-BH5的同時，開發(fā)了配套的細胞培養(yǎng)試劑，可用于細胞培養(yǎng)和后續(xù)相關(guān)實驗。

葡萄糖脂毒性研究：胰島 β 細胞鑒定標志物，胰島 β 細胞功能性標志物，胰島 β 細胞糖脂化合物研究。篩選胰島素分泌促進藥物：促胰島素分泌藥物篩選，功能機制研究，干細胞zhi liao糖尿病參照對比?；诟咄亢Y選的 siRNA 靶標驗證和篩選：高通量胰島 β 細胞靶點鑒定和篩選，糖尿病疾病模型構(gòu)建，促胰島素分泌藥物篩選。干細胞zhi liao糖尿?。簠⒄諏Ρ取uman Cell Design 開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細胞系生產(chǎn)方法。首先，將每個轉(zhuǎn)導(dǎo)的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位。在 6 到 8 個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤，這導(dǎo)致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達 hTERT 的慢病毒進行轉(zhuǎn)導(dǎo)，并移植到其他 SCID 小鼠中表達 EndoC-BH5 的 HLA-A2 重新利用抗yan藥物或發(fā)現(xiàn) I 類抗原肽加工和呈遞的抑制劑,其細胞因子反應(yīng)與原發(fā)性類似。

在EndoC-βH5細胞中檢測到所有對β細胞身份和功能重要的轉(zhuǎn)錄因子的表達。與成人b細胞相比，EndoC-βH5細胞中的表達水平相似（FOXA2、MNX1、NKX2.2）或更高（HOPX、MAFB、NEUROD1、PAX6、PDX1）。GLIS3、NKX6.1和MAFA在EndoC-βH5細胞中以較低水平表達EndoC-βH5細胞中表達與胰島素分泌相關(guān)的受體，包括腎上腺素(ADRA2A)、脂肪酸(FFAR1、FFAR3)、GABA(GABRB3)、胰hao xue tang素(GCGR)、生長抑素(SSTR2)和腸jiang xue tang素受體，例如胰gao xue tang素樣受體肽-1(GLP1R)和胃抑制多肽(GIPR)。重要的是，EndoC-βH5細胞中的GLP1R、GIPR和GCGR比EndoC-bH1細胞中更豐富。Huamn cell design(HCD)提供的糖尿病細胞模型經(jīng)過了法國生物醫(yī)學(xué)局批準。天津人胰腺B細胞糖尿病細胞模型

EndoC-BH1 和增殖的 EndoC-BH5 細胞分別在 Opti-B1 和 Ulti-b1 培養(yǎng)基中的 BCoat涂層塑料板上培養(yǎng)。人源胰島B細胞糖尿病細胞模型無菌環(huán)境操作

作為一個開創(chuàng)性的生物技術(shù)公司，Human Cell Design 已經(jīng)走在了人源細胞模型研發(fā)的前沿。通過其獨特的細胞工程技術(shù)，HCD 能夠生成高度均一、功能性強的人源胰島β細胞。這些細胞不僅能夠在實驗室環(huán)境中大量生產(chǎn)，還能穩(wěn)定表達各種重要的胰島細胞標記物。這些細胞模型廣泛應(yīng)用于糖尿病研究中，從基礎(chǔ)研究到藥物篩選，HCD 的細胞系都發(fā)揮了重要作用，為科學(xué)家們提供了寶貴的研究工具。目前，Human Cell Design 的細胞模型已經(jīng)在全球 200 多家生物醫(yī)藥和科研機構(gòu)中使用，為眾多糖尿病研究提供了堅實的基礎(chǔ)。這些細胞模型不僅具有高度的功能性，還展示了穩(wěn)定性和可重復(fù)性，使得研究結(jié)果更加可靠。通過持續(xù)的技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品優(yōu)化，HCD 將繼續(xù)帶領(lǐng)人源細胞模型的發(fā)展，為糖尿病等重大疾病的研究和zhi liao貢獻力量。人源胰島B細胞糖尿病細胞模型無菌環(huán)境操作