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MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-12-07

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences23966(PEI25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良。產(chǎn)品特點(diǎn):適用于生產(chǎn)mABs、rAbs、bsABs和病毒載體(AVV、LV、BEV);在HEK293、CHO和Sf9細(xì)胞系中高度有效;適用于從研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的各個(gè)階段;可預(yù)測(cè),可大規(guī)模生產(chǎn);兩周內(nèi)即可生成大量目標(biāo)蛋白或病毒;高轉(zhuǎn)染效率;大量已發(fā)表的文獻(xiàn)支持。用PEI轉(zhuǎn)染時(shí),一般和DNA的比例是?MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

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PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí),一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯(cuò),輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí),一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因?yàn)镻EI對(duì)細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實(shí)證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio,相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,后續(xù)購買請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)備新品牌。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!PEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢(shì)?

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注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。如想申請(qǐng)PEI試用裝,歡迎關(guān)注公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)“申請(qǐng)PEI”,即可參加!

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有人知道PEI轉(zhuǎn)染試劑的價(jià)格么?MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,歡迎咨詢上海曼博生物。也可關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,查看更多技術(shù)文章!MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑說明書