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寧波PCR法支原體檢測常見問題

來源: 發(fā)布時間:2024-03-15

常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)則靈敏度比較低,因背景熒光的存在,細胞輕度支原體污染不易檢出;細胞裂解死亡產(chǎn)生碎片也會被熒光染料染色被誤認為是支原體染色所致造成假陽性;另外,熒光染色法一般要求培養(yǎng)無污染的指示細胞作為對照,增加了檢測的工作量。目前,PCR法為主流的支原體檢測手段,PCR法比傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法檢測時間縮短,且靈敏度高。支原體檢測方法有哪些。寧波PCR法支原體檢測常見問題

在進行支原體檢測之前,對支原體DNA進行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進行后續(xù)的檢測和分析。以下是進行支原體DNA提取的主要原因和目的:去除抑制物質:某些樣品中可能含有對PCR或其他分子檢測方法有抑制作用的物質,如酶抑制劑、有機溶劑等。支原體DNA提取過程可以幫助去除這些抑制物質,提高后續(xù)PCR或分子檢測的成功率。保護DNA完整性:支原體DNA在樣品中容易受到外界環(huán)境的影響和降解。提取過程中的適當處理可以保護DNA的完整性,防止其在提取過程中受到損傷。杭州快速支原體檢測公司支原體檢測的背景知識與法規(guī)要求。

我國藥典規(guī)定的支原體檢測方法為培養(yǎng)法和指示細胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處,如所需時間較長,有的操作復雜等?!吨袊幍?020年版3301支原體檢測法》中指出:除培養(yǎng)法和DNA染色法外,也可采用經(jīng)國家藥品檢定機構認可的其他方法,對支原體進行檢測。由于支原體檢測存在必要性,如何盡可能提高檢測的準確率以及效率尤為關鍵。不少業(yè)內指導原則指出,支原體的核酸法檢測,通過嚴格且充分的方法學驗證,可以替代藥典中對的培養(yǎng)法與DNA染色法。

常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽性,因為在培養(yǎng)時需以陽性菌株為對照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對實驗室條件要求比較高。被污染的細胞如何做支原體檢測?

南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①避免在不必要的情況下凍融試劑盒中的試劑,檢測試劑盒需避光儲存于-18℃以下;②本試劑盒所用的試劑不能隨意替換,以免影響檢測效果。不同批號的試劑盒各成分也不可相互混用;③嚴格區(qū)分質控品和反應試劑的使用,防止試劑的污染,導致假陽性;④完成實驗后用10%次氯酸或75%精或紫外燈處理工作臺與移液器。PCR相關實驗中污染問題時常發(fā)生,常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染、天然基因組DNA污染、試劑的污染以及標本間的污染。擴增產(chǎn)物污染是嚴重、難以處理的的污染類型,由于一旦發(fā)生PCR產(chǎn)物污染,實驗室必須停止實驗,直至污染被完全清    除為止,PCR產(chǎn)物污染短時間內很難消除,一般需要2-4周才能消除,而且實驗相關的試劑、耗材有很大可能會被污染,需全部更換。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒,試劑盒經(jīng)過精心開發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應中產(chǎn)生擴增,由此避免污染物帶來的檢測誤差,減少實驗室污染造成檢測結果不準確的可能性。qPCR法支原體檢測的優(yōu)點有哪些?上海便捷支原體檢測注意事項

生物制品支原體檢測。寧波PCR法支原體檢測常見問題

隨著我國生物以及細胞治     療相關產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,相關的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測就是其中必不可少的一項。準確進行支原體檢測,是避免外源因子污染,保證產(chǎn)品質量的重要質控手段。南京正揚生物科技有限公司的qPCR法支原體檢測試劑盒,檢測體系(包括提取和檢測)由全球蕞第三方實驗室Eurofins權      威認證,驗證報告具備公正性、權     威性,達到歐洲典(EP2.6.7)和日本典(JPG3)要求。每個批次產(chǎn)品均有廠家的質檢報告(COA)。寧波PCR法支原體檢測常見問題