EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過(guò)一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱(chēng)作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見(jiàn)圖1。通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)設(shè)備檢測(cè)到增殖的細(xì)胞。EdU檢測(cè)法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針你知道EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)嗎？河南提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒價(jià)格

EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測(cè)染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測(cè)，可有效避免樣品損傷，在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。EdU染色(a)通過(guò)用10:1去離子水稀釋10x反應(yīng)緩沖液進(jìn)行配制1xEdU反應(yīng)緩沖液；(b)按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱(chēng)取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱(chēng)量，稱(chēng)量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過(guò)±20%，且該粉末較易氧化，使用后請(qǐng)旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報(bào)廢或更換浙江品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的價(jià)格。

細(xì)胞增殖分析是細(xì)胞生長(zhǎng)和分化研究的關(guān)鍵，在藥物開(kāi)發(fā)階段常用來(lái)評(píng)估化學(xué)藥物的毒性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的控制作用。經(jīng)過(guò)之后的細(xì)胞分裂階段，各個(gè)子代細(xì)胞會(huì)從母細(xì)胞中接收到大約一半的熒光染料。采用流式細(xì)胞儀對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析，即可測(cè)定出自標(biāo)記結(jié)合起，單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群所經(jīng)歷的傳代數(shù)目。通常根據(jù)平均DNA含量或細(xì)胞代謝參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)，此類(lèi)分析可以報(bào)告出總細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞數(shù)目，或者測(cè)定出單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的DNA合成情況。細(xì)胞增殖染料稀釋分析主要基于細(xì)胞膜通透性，熒光團(tuán)分子、染料進(jìn)入細(xì)胞后，將會(huì)共價(jià)結(jié)合到蛋白質(zhì)上的氨基基團(tuán)上，從而使染料能夠長(zhǎng)時(shí)間停留在細(xì)胞中。

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒(méi)過(guò)細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)廠家。

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本試劑盒可以檢測(cè)到細(xì)胞或組織樣品中單個(gè)的增殖細(xì)胞，同時(shí)也可以對(duì)細(xì)胞或組織樣品總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量檢測(cè)。本試劑盒可以檢測(cè)培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也可以檢測(cè)組織切片，但均需提前進(jìn)行EdU的摻入。細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。公認(rèn)的精確的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法是直接檢測(cè)細(xì)胞中DNA的合成。初使用的通過(guò)檢測(cè)DNA合成來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法是放射性標(biāo)記核苷摻入法，如氚標(biāo)記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法河南提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒價(jià)格

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