來源：ZSCI基礎(chǔ)研究中如果加入動物實驗部分則使得研究更加趨于完善，投稿時中稿率也相應(yīng)會增加。但將動物實驗做好卻不是一件容易的事情。這篇文章主要講動物模型的構(gòu)建技術(shù)，把骨科、糖尿病相關(guān)的動物模型構(gòu)建做了一個***的技術(shù)匯總，建議先碼后讀，文章內(nèi)容有部分做了簡化，想看詳細講解可以在文末獲取課件！一、骨科相關(guān)動物模型1.骨關(guān)節(jié)炎1）骨關(guān)節(jié)炎模型構(gòu)建方法（誘發(fā)性）-關(guān)節(jié)腔內(nèi)手術(shù)法、關(guān)節(jié)腔注射法。2）模型評分標準①SafraninO染色與OARSI評分（PMID：31046827、30942801）②HE染色與OARSI評分（PMID：30609097）③SafraninO染色與Mankin評分（PMID：30609097）2.骨質(zhì)疏松癥1）骨關(guān)節(jié)炎模型構(gòu)建方法去趨法模型PMID：31037128實驗動物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下進行雙側(cè)卵巢切除術(shù)以誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥，同時對照組小鼠*進行卵巢外置但未切除。2）模型檢測指標(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相關(guān)指標檢測3.類風濕性關(guān)節(jié)炎類風濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病狀態(tài)，其特征是滑膜增生，軟骨退化和脊椎關(guān)節(jié)的骨侵蝕4.強直性脊柱炎1）強直性脊柱炎模型構(gòu)建方法2）模型檢測指標。動物疾病模型的另一個富有成效的用途。泰州如何使用疾病動物模型建模

    2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升，同樣，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖3所示。表3表4②體重變化：(mean±sd)，如圖4所示：2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第4天開始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比，大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無差異。③卵巢重量：如表5、圖5所示，2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過順鉑注射后卵巢重量相比對照組，都有不同程度縮減，其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p＜)，4mg、6mg組無明顯差異。表5④動情周期觀察(陰道涂片)：3mg組動物死亡時間早，無完整的動情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動情周期4-5天。分為四個階段，動情前期：撇圓形有核上皮細胞占絕大多數(shù)，白細胞和角化上皮細胞很少(圖a)。動情期：角化上皮細胞占多大多數(shù)，由散在增至集白細胞和有核上皮細胞很少(圖b)。動情后期：片狀角化上皮細胞，有核上皮細胞和白細胞3種都有，無太大差異(圖c)。動情間期：白細胞占絕大多數(shù)，有核上皮細胞和角化上皮細胞很少(圖d)。表6⑤病理結(jié)果：如圖7所示。泰州呼吸疾病動物模型建模驗性動物模型是指研究者通過使用物理的、化學(xué)的和生物的致病因素作用于動物。

1、動物模型名稱：高脂飼料致高脂血癥大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g1、實驗方法：大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)20天。分別于造模前和造模20天**，測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量2、檢測標準：造模20天后模型組大鼠血清TC、TG、HDLC、LDLC均***增加，與對照組比較具統(tǒng)計學(xué)差異。1.提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動物或相關(guān)組織材料。

    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內(nèi)切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉(zhuǎn)到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學(xué)顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結(jié)果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現(xiàn)在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個?？梢院喕瘜嶒灢僮骱蜆悠肥占?。

1、動物模型名稱：膽管結(jié)扎致肝膽管性肝硬化大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：5周5、實驗動物體重：200~220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：用膽管結(jié)扎法。大鼠按10mg/kg體重腹腔注射3％戊巴比妥鈉麻醉，腹部皮膚消毒，無菌操作沿腹部正中線剪開腹腔，分離出膽管，在膽管近端和遠端2處結(jié)扎膽管。手術(shù)后正常飼養(yǎng)28天。28天后解剖取肝臟進行組織病理學(xué)檢查。2、檢測標準：肝臟病理切片鏡下小膽管伴纖維組織增生積分按程度為0-3分：0分：無明顯病變；1分：呈局灶性分布，受累面積在30%以下者；2分：呈多灶性分布，受累面積在30%-70%之間者；3分：呈彌漫性分布，受累面積在70%以上者。統(tǒng)計分析：每份標本在低倍視野(10×10)下依次選取左上、右上、左下、右下、中間5個視野（共1.5mm2）進行觀察，測定并計算視野內(nèi)小膽管伴纖維組織增生總面積。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復(fù)制出來。面癱疾病動物模型建模購買

這類動物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。泰州如何使用疾病動物模型建模

    r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步驟4、鑒定為pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周齡、雌性小鼠6周齡分別與野生型異性小鼠交配獲得f1代雜合子小鼠，圖2為本發(fā)明f1代雜合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程圖，小鼠出生后20天進行pcr鑒定，若有陽性小鼠出生，則表示轉(zhuǎn)基因已經(jīng)整合到生殖細胞。(1)通過pcr方法對獲得的f1代小鼠進行基因型的鑒定：(a)dna的提?。悍椒?：采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()來獲得高純度的基因組dna。步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2～5mm)，放入離心管中，加入180μlbuffergl，20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步驟b.將步驟a離心管內(nèi)于56℃孵育過夜。步驟c.過夜后12000rpm離心2min去除雜質(zhì)。步驟d.加入200μlbuffergb和200μl無水乙醇，充分混勻。步驟e.將吸附柱放在收集管上，將步驟d得到的樣品加到吸附柱里，12000rpm離心2min，棄掉收集管中液體。步驟f.棄去液體后在吸附柱中加入500μlbufferwa，12000rpm離心1min，棄掉收集管中液體。步驟g.在收集管中加入700μlbufferwb，12000rpm離心1min。棄掉收集管中液體。注意：bufferwb需要與100％乙醇預(yù)混，沿管壁加入bufferwb沖走殘余的鹽。步驟h.重復(fù)步驟g一次。泰州如何使用疾病動物模型建模

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