人乳腺*裸鼠模型：1、實驗方法：**細胞移植法、**組織塊移植法。a.**細胞移植：**細胞在二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)至足夠數(shù)量。取對數(shù)生長期的**細胞，用0.25％胰酶消化，用不完全培養(yǎng)液配成濃度不低于1×107個/mL的細胞懸液，于小鼠乳腺脂肪墊注射0.2mL細胞懸液，注意每次注射前需混勻細胞懸液。b.**組織塊移植：**接種于動物長至1cm時，取新鮮的**組織塊，在不完全培養(yǎng)液中漂洗，切取生長良好、魚肉裝的瘤組織，將其剪切成約1.5mm直徑的小**塊。將動物接種部位消毒，剪一小口，將小**塊經(jīng)這一小口接種到小鼠乳腺脂肪墊，如切口較大需要縫合切口。上海東寰在動物建模方面已經(jīng)有了多年的技術(shù)經(jīng)驗?；窗布膊游锬Ｐ徒r格

步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內(nèi)，產(chǎn)出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴增產(chǎn)物測序，鑒定是否為嵌合體。本發(fā)明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對應(yīng)的擴增產(chǎn)物大小為，primers2對應(yīng)的擴增產(chǎn)物為。用于f0代小鼠測序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。正規(guī)疾病動物模型建模供應(yīng)商可以克服人類某些疾病潛伏期長，病程長和發(fā)病率低的缺點。

2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升，同樣，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖3所示。表3表4②體重變化：(mean±sd)，如圖4所示：2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第4天開始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比，大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無差異。③卵巢重量：如表5、圖5所示，2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過順鉑注射后卵巢重量相比對照組，都有不同程度縮減，其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p＜)，4mg、6mg組無明顯差異。表5④動情周期觀察(陰道涂片)：3mg組動物死亡時間早，無完整的動情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動情周期4-5天。分為四個階段，動情前期：撇圓形有核上皮細胞占絕大多數(shù)，白細胞和角化上皮細胞很少(圖a)。動情期：角化上皮細胞占多大多數(shù)，由散在增至集白細胞和有核上皮細胞很少(圖b)。動情后期：片狀角化上皮細胞，有核上皮細胞和白細胞3種都有，無太大差異(圖c)。動情間期：白細胞占絕大多數(shù)，有核上皮細胞和角化上皮細胞很少(圖d)。

腰椎間盤突出是造成全球大部分地區(qū)工作缺失和活動受限的主要疾病，隨著日常生活節(jié)奏的不斷加快,腰椎間盤突出癥已經(jīng)成為臨床脊柱外科的常見病和多發(fā)病,而且發(fā)病人群越來越呈現(xiàn)年輕化及普遍化的趨勢。該病主要是由于腰椎長期的受力不均或突然性外傷,導(dǎo)致腰椎纖維環(huán)出現(xiàn)變形、破裂，纖維環(huán)、髓核及軟骨終板單獨或同時外突,從而壓迫到坐骨神經(jīng)、神經(jīng)根或馬尾神經(jīng)，患者出現(xiàn)腰部疼痛，牽連股部，下肢足部放射性疼痛，引起神經(jīng)功能、運動功能障礙，特定身體部位出現(xiàn)麻痹或癱瘓癥狀。如何定義好的小鼠疾病模型？

實驗期間每天進行陰道涂片，觀測動情周期變化。進一步地，檢測***水平是指：檢測雌***(e2)、促卵泡生長素(fsh)和促黃體生成素(lh)的水平。進一步地，檢測對比卵巢重量是指：比較各組大鼠雙側(cè)卵巢臟器系數(shù)。進一步地，陰道涂片是指：采用陰道脫落細胞涂片法，使用染色劑為亞甲基藍。本發(fā)明利用順鉑成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，為基礎(chǔ)研究建立穩(wěn)定的卵巢早衰動物模型奠定了良好的基礎(chǔ)。本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義。提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準。附圖說明圖1：e2水平檢測結(jié)果示意圖。圖2：fsh水平檢測結(jié)果示意圖。圖3：lh水平檢測結(jié)果示意圖。圖4：大鼠體重檢測結(jié)果示意圖。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復(fù)制出來。Balbc裸鼠疾病動物模型建模供應(yīng)商

查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻?；窗布膊游锬Ｐ徒r格

f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內(nèi)切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉(zhuǎn)到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學(xué)顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結(jié)果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現(xiàn)在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個?；窗布膊游锬Ｐ徒r格

上海東寰生物科技有限公司是一家從事原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及售后的服務(wù)型企業(yè)。公司坐落在上海市嘉定區(qū)興賢路1180號5幢2樓206室，成立于2015-09-24。公司通過創(chuàng)新型可持續(xù)發(fā)展為重心理念，以客戶滿意為重要標準。公司主要經(jīng)營原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型等產(chǎn)品，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，均通過商務(wù)服務(wù)行業(yè)檢測，嚴格按照行業(yè)標準執(zhí)行。目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用與全國30多個省、市、自治區(qū)。我們以客戶的需求為基礎(chǔ)，在產(chǎn)品設(shè)計和研發(fā)上面苦下功夫，一份份的不懈努力和付出，打造了東寰生物產(chǎn)品。我們從用戶角度，對每一款產(chǎn)品進行多方面分析，對每一款產(chǎn)品都精心設(shè)計、精心制作和嚴格檢驗。上海東寰生物科技有限公司以市場為導(dǎo)向，以創(chuàng)新為動力。不斷提升管理水平及原代細胞，細胞增殖與凋亡，細胞檢測試劑盒，動物疾病模型產(chǎn)品質(zhì)量。本公司以良好的商品品質(zhì)、誠信的經(jīng)營理念期待您的到來！