pcrmix：反應(yīng)條件：pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳鑒定結(jié)果如圖3所示，從圖3中可以看出，6、8、9號(hào)為pirb基因敲入小鼠在、，wt小鼠pcr產(chǎn)物沒(méi)有這兩個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。(c)短鏈pcr反應(yīng)，引物如下：primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能夠擴(kuò)增出344bp的產(chǎn)物，而野生型沒(méi)有。pcr體系：反應(yīng)條件：(2)f1代小鼠測(cè)序：通過(guò)pcr擴(kuò)增后測(cè)序鑒定小鼠基因型，如圖4所示，為6號(hào)pirb基因敲入小鼠測(cè)序峰圖，pcr所用引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1：5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern雜交檢測(cè)f1代小鼠基因型：采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割dna分子，切割示意圖如圖5。具體的southern雜交檢測(cè)過(guò)程如下：步驟a、提取f1代小鼠尾部dna；步驟b、制備探針，通過(guò)pcr方法將dig-dutp滲入到步驟a的dna分子中。生物醫(yī)學(xué)研究的進(jìn)展常常依賴于使用動(dòng)物模型作為實(shí)驗(yàn)假說(shuō)和臨床假說(shuō)二者的試驗(yàn)基礎(chǔ)。青浦區(qū)正規(guī)疾病動(dòng)物模型建模

模型小鼠與對(duì)照小鼠BALF中各類細(xì)胞因子的表達(dá)水平對(duì)比6.2.2肺組織病理學(xué)檢測(cè)HE染色檢測(cè)：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，開(kāi)胸暴露胸腔：取左側(cè)肺葉固定于10%甲醛溶液24h，常規(guī)脫水石蠟包埋，切片行HE染色，光鏡下觀察。結(jié)果顯示：空白對(duì)照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡大小均勻，氣道黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，纖毛排列整齊；模型對(duì)照組小鼠肺組織肺間隔增厚，支氣管部分上皮細(xì)胞脫落，有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。模型小鼠(右)相對(duì)于對(duì)照組小鼠肺部組織HE染色對(duì)比阿爾辛藍(lán)—過(guò)碘酸雪夫氏染色（AB-PAS染色）檢測(cè)：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，開(kāi)胸暴露胸腔：取左側(cè)肺葉固定于10%甲醛溶液24h，常規(guī)脫水石蠟包埋脫蠟至水，切片行AB-PAS染色，光鏡下觀察。淮安裸鼠疾病動(dòng)物模型建模可以簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作和樣品收集。

2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升，同樣，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖3所示。表3表4②體重變化：(mean±sd)，如圖4所示：2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第2天開(kāi)始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第4天開(kāi)始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比，大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無(wú)差異。③卵巢重量：如表5、圖5所示，2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過(guò)順鉑注射后卵巢重量相比對(duì)照組，都有不同程度縮減，其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p＜)，4mg、6mg組無(wú)明顯差異。表5④動(dòng)情周期觀察(陰道涂片)：3mg組動(dòng)物死亡時(shí)間早，無(wú)完整的動(dòng)情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動(dòng)情周期4-5天。分為四個(gè)階段，動(dòng)情前期：撇圓形有核上皮細(xì)胞占絕大多數(shù)，白細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖a)。動(dòng)情期：角化上皮細(xì)胞占多大多數(shù)，由散在增至集白細(xì)胞和有核上皮細(xì)胞很少(圖b)。動(dòng)情后期：片狀角化上皮細(xì)胞，有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞3種都有，無(wú)太大差異(圖c)。動(dòng)情間期：白細(xì)胞占絕大多數(shù)，有核上皮細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖d)。表6⑤病理結(jié)果：如圖7所示

可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。下述實(shí)施例中所涉及的儀器、試劑、材料等，若無(wú)特別說(shuō)明，均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)儀器、試劑、材料等，可通過(guò)正規(guī)商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中所涉及的實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)方法等，若無(wú)特別說(shuō)明，均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)方法等。實(shí)施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液50ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg順鉑注射液，按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例3建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液25ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成4mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)施例4：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中。能夠準(zhǔn)確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。

建立一種理想的腰椎間盤突出的動(dòng)物模型對(duì)本病的機(jī)制研究和臨床防治具有重要意義?，F(xiàn)有模型對(duì)腰椎間盤突出癥的模擬均存在明顯不足，或與臨床實(shí)際病變部位有一定差距，如慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型；或操作難度大，對(duì)動(dòng)物損傷重，如自體髓核移植模型，選擇性神經(jīng)根結(jié)扎模型。因此，急需一種新的操作簡(jiǎn)單，重復(fù)率高，穩(wěn)定且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了建立一種操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定好且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型，本發(fā)明提供了一種大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的制備方法。其包括以下步驟：步驟一、麻醉大鼠；步驟二、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)或右側(cè)作縱行切口，切開(kāi)皮膚，鈍性分離椎旁肌，暴露腰4椎間孔和腰5椎間孔；步驟三、將壓迫元件插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。其中，步驟一具體為：腹腔注射1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠后，將大鼠背部剃毛，碘伏消毒背部皮膚，俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，鋪無(wú)菌巾。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件為l型棒；步驟三具體為：將2根l型棒的***端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，l型棒的第二端置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。利用動(dòng)物疾病模型來(lái)研究人類疾病可以克服平時(shí)一些不易見(jiàn)到不便于在病人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的人類疾病的研究。嘉定區(qū)呼吸疾病動(dòng)物模型建模

什么是疾病動(dòng)物模型建模？青浦區(qū)正規(guī)疾病動(dòng)物模型建模

即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點(diǎn)還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動(dòng)物模型對(duì)于pirb基因功能的研究和在體驗(yàn)證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。通過(guò)pirb敲入動(dòng)物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點(diǎn)的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗(yàn)證pirb基因敲入效果的測(cè)序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進(jìn)行southern鑒定的結(jié)果圖。青浦區(qū)正規(guī)疾病動(dòng)物模型建模