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EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子,通過(guò)基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性,通過(guò)檢測(cè)EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。與BrdU檢測(cè)方法相比,EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測(cè)染料只有BrdU抗體大小的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測(cè),可有效避免樣品損傷,在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒前的安全檢查。天津咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)
Jurkat細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時(shí)后染色,然后通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。從流式結(jié)果圖中可以看出,EdU標(biāo)記的細(xì)胞有較高比例的綠色熒光陽(yáng)性細(xì)胞,呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽(yáng)性(強(qiáng)染色)的兩個(gè)峰,分別對(duì)應(yīng)于未增殖細(xì)胞和增殖細(xì)胞。經(jīng)過(guò)Hydroxyurea處理的細(xì)胞,綠色熒光陽(yáng)性的細(xì)胞幾乎完全消失,剩下一個(gè)綠色熒光陰性的峰。Hela細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列),或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列),2小時(shí)后染色(步驟染Hoechst,方便觀察增殖細(xì)胞比例),然后通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。鏡下可見(jiàn),*EdU標(biāo)記的細(xì)胞有一部分染上綠色熒光的增殖細(xì)胞,未增殖細(xì)胞的細(xì)胞核呈藍(lán)色單染。 江西咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒如何發(fā)揮重要作用?上海東寰告訴您。
細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液,室溫培養(yǎng)30分鐘,棄固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,搖床孵育5分鐘,以中和過(guò)量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細(xì)胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;該產(chǎn)品是采用成像檢測(cè)方法對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理,固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測(cè)。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)
細(xì)胞增殖是評(píng)價(jià)細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見(jiàn),能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中,通過(guò)基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng),把記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣就可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過(guò)夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn),操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。 使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒到底有什么好處?
EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧啶)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。通過(guò)以上原理圖的對(duì)比,大家不難發(fā)現(xiàn),EdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖,無(wú)須抗體,無(wú)變性步驟,保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性,是一種簡(jiǎn)單,可靠,省事的創(chuàng)新方法。但是,現(xiàn)在依然有很多研究者們依然沒(méi)有得到細(xì)胞增殖檢測(cè)*行之有效,節(jié)約反應(yīng)時(shí)間的方法。Abbkine的EdU檢測(cè)試劑盒有兩個(gè)型號(hào),分別匹配的是兩種不同的熒光通道,細(xì)胞增殖成像分析試劑盒(EdU法)(綠色熒光),KTA2030,488通道;細(xì)胞增殖成像分析試劑盒(EdU法)(橘紅色熒光),KTA2031,549通道上海東寰與您分享EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒發(fā)揮的重要作用。江西哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)買
EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒使用時(shí)的注意事項(xiàng)。天津咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)
本試劑盒包含EdU法檢測(cè)所需要的所有組份,同時(shí)提供了藍(lán)色細(xì)胞核染料Hoechst33342,可以用來(lái)復(fù)染所有細(xì)胞核,也可用于細(xì)胞周期分析。使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè),也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。對(duì)6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞(每孔500μl的Click反應(yīng)液)、96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞(每孔50μl的Click反應(yīng)液)、每管細(xì)胞數(shù)量為10-100萬(wàn)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)(每管500μl的Click反應(yīng)液)以及冰凍或石蠟切片的檢測(cè)(每個(gè)樣品100-200μl的Click反應(yīng)液)天津咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)