長久以來人們發(fā)現(xiàn)，以人本身作為實驗對象來推動醫(yī)學的發(fā)展是困難的，臨床所積累的經(jīng)驗不僅在時間和空間上存在著局限性，許多實驗在道義上和方法學上還受到種種限制。而動物模型的吸引力就在于它克服了這些不足點，其在生物醫(yī)學研究中所起到的獨特作用，正受到越來越多的科技工作者的重視。動物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面。（一）避免了在人身上進行實驗所帶來的風險臨床上對外傷、中毒、腫痛病因等研究是有一定困難的，甚至是不可能的，如急性和慢性呼吸系統(tǒng)疾病研究進很難重復(fù)環(huán)境污染的作用。輻射對機體的損傷也不可能在人身上反復(fù)實驗。而動物可以作為人類的替難者，在人為設(shè)計的實驗條件下反復(fù)觀察和研究。上海東寰提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。浦東新區(qū)品牌疾病動物模型建模

1、動物模型名稱：酒精誘導(dǎo)的肝硬化大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：5周5、實驗動物體重：150g-160g6、實驗動物環(huán)境：SPF級。1、實驗方法：用酒精誘導(dǎo)法。大鼠每天按10mL/kg體重灌服酒精混合物（酒精：吡唑：玉米油＝10mL：25mg：2mL）造模，每周2次按0.3mL/kg劑量腹腔注射給予CCl4:橄欖油＝1：3，連續(xù)灌服60天。解剖取肝臟進行組織病理學檢查。2、檢測標準：肝組織可見肝硬化病理改變（S1級~S4級）。南通呼吸疾病動物模型建模通過小鼠疾病模型的構(gòu)建有助于我們深入揭示潛在致病基因作用機制。

步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內(nèi)，產(chǎn)出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴增產(chǎn)物測序，鑒定是否為嵌合體。本發(fā)明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對應(yīng)的擴增產(chǎn)物大小為，primers2對應(yīng)的擴增產(chǎn)物為。用于f0代小鼠測序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。

pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經(jīng)元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉(zhuǎn)基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導(dǎo)幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應(yīng)。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點，為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機制提供了很好的工具。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型。必須真正了解研究者感興趣且需要的小鼠疾病模型。

1、動物模型名稱：固定制動致制動應(yīng)激大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：180~220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級。1、實驗方法：采用固定制動方法。大鼠每天固定5~6小時進行制動應(yīng)激，連續(xù)制動40天。2、檢測標準：模型組大鼠體重增長速度較正常對照緩慢；曠場試驗的結(jié)果顯示，造模結(jié)束時與正常對照組比較，模型組大鼠的水平穿越格數(shù)、垂直運動次數(shù)、理毛時間均減少，**格停留時間、糞便粒數(shù)均增加；ELISA的結(jié)果顯示，造模結(jié)束時與正常對照組比較，模型組大鼠CRH、ACTH、CORT含量均明顯增高。人類疾病的動物模型是指各種醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物?；窗蔡峁┘膊游锬Ｐ徒?/p>

查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻。浦東新區(qū)品牌疾病動物模型建模

實驗第21天起將小鼠置于霧化激發(fā)器內(nèi)，給予2%OVA生理鹽水霧化激發(fā)，1次/d，每次30min，連續(xù)7天，將小鼠呼吸急促，搔鼻抓癢、嗆咳煩躁、點頭運動等作為小鼠模型成功的標準。正常對照組以生理鹽水代替OVA腹腔注射和霧化激發(fā)，操作同上所述。6.2模型鑒定及后續(xù)檢測：6.2.1小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)TH2型細胞因子蛋白水平檢測待造模完成后，抽取BALF后用ELISA方法檢測其中TSLP、IL-33和MUC5AC的表達情況。附支氣管肺泡灌洗液抽取方法：小鼠取血后，開胸，分離縱膈，注射器抽取3ml生理鹽水從氣管插管推入肺中，每次反復(fù)灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃3000r/min離心15min，取上清。結(jié)果顯示：模型小鼠與對照組小鼠相比，炎性因子及趨化因子水平均有性升高。浦東新區(qū)品牌疾病動物模型建模