4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標記方法免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些，應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應重疊，且盡量遠離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應考慮先孵育顏色較弱的二抗。EdU細胞增殖檢測試劑盒的功能具體介紹。山東哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

保存條件：4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。注意事項：由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。湖南提供EdU細胞增殖檢測試劑盒說明書EdU細胞增殖檢測試劑盒的優(yōu)點體現(xiàn)在哪？

細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應用于流式細胞儀檢測。

    直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的準確方法之一，的EdU細胞增殖檢測試劑盒采用另外一種胸腺嘧啶核苷酸類似物-EdU（5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷），在細胞增殖時EdU能夠插入正在復制的DNA分子中，利用EdU與染料之間的點擊化學(ClickChemistry)反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析，可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法相比(圖1)，更簡單，更快速，更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內(nèi)更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性（酸解、熱解、酶解）處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。EdU分析方法反應條件比較溫和，我們提供的一系列AndyFluor?染料標記可以用于多色通道選擇。 EdU細胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢如何？

快速—–無需過夜，省卻抗原抗體反應。整個檢測過程只需 2.5 小時，縮短實驗周期。準確—–標記率高且無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完。靈敏—–無需抗體，檢測染料為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測。兼容—–對樣品幾乎無損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。本試劑盒適用于培養(yǎng)的細胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測到細胞或組織樣本中的單個增殖細胞，也可以對細胞或組織樣本總體的細胞增殖情況進行定量分析。EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家。江蘇EdU細胞增殖檢測試劑盒供應商

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EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU與T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應，能在細胞和組織水平更準確地反映DNA復制活性~山東哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒購買