缺點(diǎn)：該移植模型的原發(fā)出現(xiàn)與轉(zhuǎn)移發(fā)生之間時(shí)間間隔短，不利于藥物藥效研究;且細(xì)胞為鼠源，與人類(lèi)有一定的差異。2異種移植模型異種移植模型是將人類(lèi)的細(xì)胞或組織移植入免疫缺陷型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠，例如無(wú)胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般來(lái)說(shuō)，免疫缺陷程度越高，成瘤性越好。的相關(guān)研究中，人源細(xì)胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft，CDX)模型和患者組織異種移植(patient-derivedxenograft，PDX)模型已得到廣泛應(yīng)用。CDX模型方法：將5×106的人A375黑色素瘤細(xì)胞皮下注射N(xiāo)OD/SCID小鼠腹側(cè)的雙側(cè)，成功構(gòu)建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法：有研究者將93個(gè)新鮮的患者組織切成2×2×2mm3碎片的大小，皮下接種6周大的NOD/SCID雌性小鼠，建立PDX模型。優(yōu)點(diǎn)：保留了病人的組織學(xué)和遺傳學(xué)特征，可模擬潰瘍狀態(tài)對(duì)人類(lèi)黑色素瘤預(yù)后的影響。缺點(diǎn)：此模型移植后的潛伏期長(zhǎng)，連續(xù)傳代后鼠基質(zhì)被人類(lèi)基質(zhì)替代，移植率可變，免疫系統(tǒng)受損，有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫細(xì)胞功能的缺乏。三、轉(zhuǎn)基因小鼠模型可以通過(guò)異位表達(dá)基因，引入特定的致突變或滅活抑制基因來(lái)對(duì)小鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)基因黑色素瘤模型的構(gòu)建。動(dòng)物疾病模型的另一個(gè)富有成效的用途。奉賢區(qū)心血管疾病疾病動(dòng)物模型建模

呼吸系統(tǒng)H01代碼下分為18個(gè)小類(lèi)，筆者瀏覽近五年面上項(xiàng)目，大致篩選出各個(gè)代碼下常見(jiàn)的研究方向或疾?。ó吘怪皇侨斯ずY選，準(zhǔn)確性欠佳，敬請(qǐng)諒解）。接下來(lái)為大家介紹研究較多的幾個(gè)疾病的常見(jiàn)造模方法，分別為、COPD、急性肺損傷、肺纖維化、肺動(dòng)脈高壓。動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠、大鼠、豚鼠造模試劑：卵清蛋白（OVA）、HDM（塵螨）獲得方式：一般自己構(gòu)建。在造模過(guò)程先采用抗原致敏（腹腔注射OVA和氫氧化鋁混合物或者鼻內(nèi)滴入HDM）使動(dòng)物機(jī)體內(nèi)存在致敏物，然后氣道局部激發(fā)（反復(fù)霧化或者滴鼻激發(fā)），誘導(dǎo)。楊浦區(qū)疾病動(dòng)物模型建模供應(yīng)商動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選。

建立肝動(dòng)物模型的主要方式有二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大鼠肝4-二甲基氨基偶氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝。用2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)大鼠肝。用亞氨基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)大鼠肝。用黃曲霉素誘發(fā)大鼠。2、胃：制備胃動(dòng)物模型的主要方式有①甲基膽蒽（MC）誘發(fā)小鼠胃。②不對(duì)稱(chēng)亞硝胺誘發(fā)小鼠胃。二、消化性潰瘍動(dòng)物模型（animalmodelofpepticulcer）1、應(yīng)激性潰瘍模型是研究抗?jié)兯幬锏某Ｓ媚Ｐ汀?、組胺性潰瘍模型：大鼠禁食后腹部皮下注射磷酸組胺。此法也可誘發(fā)食管、胃、十二指腸等發(fā)生潰瘍。是研究潰瘍發(fā)生機(jī)制及***藥物的常用模型。

    無(wú)縫克隆的原理：在載體末端和引物末端應(yīng)具有15-25個(gè)同源堿基（同源臂）。通過(guò)T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶，三種酶同時(shí)發(fā)揮功能，從而達(dá)到單片段或多片段與載體連接的技術(shù)。T5核酸外切酶：5‘→3’端消化DNA片段，形成粘性末端；DNA聚合酶：填補(bǔ)缺口；DNA連接酶：兩條DNA單鏈黏合起來(lái)。無(wú)縫克隆的特點(diǎn)傳統(tǒng)分子克隆無(wú)縫克隆傳統(tǒng)分子克隆和無(wú)縫克隆對(duì)比：?jiǎn)未尾迦肫危簜鹘y(tǒng)分子克隆一輪只能插入一個(gè)片段；無(wú)縫克隆單個(gè)至多個(gè)（≤5）。受限于酶切位點(diǎn)：傳統(tǒng)分子克隆是；無(wú)縫克隆不是。引入多余序列：傳統(tǒng)分子克隆是；無(wú)縫克隆不是。流程&操作時(shí)間：傳統(tǒng)分子克隆流程繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)。無(wú)縫克隆流程簡(jiǎn)單，時(shí)間短?？寺⌒剩簜鹘y(tǒng)分子克隆較低；無(wú)縫克隆單片段≥95%。實(shí)驗(yàn)流程1.載體制備載體的線性化：酶切（單酶切、雙酶切）或反向PCR擴(kuò)增。①酶切制備使用限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行載體線性化時(shí)，推薦使用雙酶切方法進(jìn)行，其次是單酶切。注意:1：經(jīng)雙酶切進(jìn)行線性化的載體無(wú)需去磷酸化，經(jīng)單酶切則需要去磷酸化；2：酶切完成后，應(yīng)將快速內(nèi)切酶失活或?qū)⒛康漠a(chǎn)物進(jìn)行純化后再用于重組反應(yīng)。②反向PCR擴(kuò)增制備載體末端引物設(shè)計(jì)：反向PCR擴(kuò)增制備線性化載體需要使用的引物。便于研究者按實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰S時(shí)采取各種樣品。

卵巢早衰(pof)是指女性40歲前以閉經(jīng)、不育、雌***缺乏及促性腺***水平升高為特征的一種疾病。一般人群中發(fā)病率為1％～3％，在繼發(fā)性閉經(jīng)婦女中占4％～8％，在20歲以前的發(fā)病率為％。近年來(lái)pof在育齡婦女中的發(fā)生率有逐年升高且向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)，由于卵巢早衰患者卵巢分泌的雌***量減少，即可導(dǎo)致一些其他疾病，如骨質(zhì)疏松、泌尿生殖道萎縮、脂質(zhì)代謝紊亂、心血管疾病。順鉑又稱(chēng)順氯氨鉑、氯氨鉑、ddp、錫鉑，是目前常用的金屬鉑類(lèi)絡(luò)合物，在分子中鉑原子對(duì)其抗**作用有重要意義。但只有順式才有意義，反式無(wú)效。其可與dna鏈交叉連接，顯示出細(xì)胞毒作用。溶解后在體內(nèi)無(wú)需載體轉(zhuǎn)運(yùn)，即可通過(guò)帶電的細(xì)胞膜。由于細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度低(4mmol/l)，氯離子為水所取代，電荷呈陽(yáng)性，具有類(lèi)似烷化劑雙功能基團(tuán)的作用，可與細(xì)胞核內(nèi)dna的堿基結(jié)合，形成三種形式的交聯(lián)，造成dna損傷，破壞dna復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，高濃度時(shí)也抑制rna及蛋白質(zhì)的合成。順鉑具有抗*譜廣、乏氧細(xì)胞有效、作用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已普遍用于***睪丸*、卵巢*、子宮*、膀胱*、頸部*、前列腺*、腦*等，療效***。但順鉑用于****有一定的毒性，會(huì)引起副作用，與卵巢的損害有直接關(guān)系，有研究表明順鉑可誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡。小鼠疾病模型研究也是人相關(guān)疾病藥物研發(fā)的起點(diǎn)。閔行區(qū)非酒肝疾病動(dòng)物模型建模

動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面！奉賢區(qū)心血管疾病疾病動(dòng)物模型建模

可以嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性一般說(shuō)來(lái)，臨床上很多疾病是十分復(fù)雜的，各種因素均起作用，患有心臟病的病人，可能同時(shí)又患有肺臟疾病或腎臟疾病等其他疾病，即使疾病完全相同的病人，因病人的年齡、性別、體質(zhì)、遺傳等各不相同，對(duì)疾病的發(fā)性發(fā)展均有影響。采用動(dòng)物來(lái)復(fù)制疾病模型，可以選擇相同品種、品系、性別、年齡、體重、活動(dòng)性、健康狀態(tài)、甚至遺傳和微生物等方面嚴(yán)加控制的各種等級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用單一的病因作用復(fù)制成各種疾病。溫度、濕度、光照、噪音、飼料等實(shí)驗(yàn)條件也可以嚴(yán)格控制。奉賢區(qū)心血管疾病疾病動(dòng)物模型建模