BrdU法和BeyoClick?EdU法檢測原理的比較。A.BrdU法需使用大分子的BrdU抗體，由于空間位阻，雙鏈DNA須變性后才能使BrdU抗體與BrdU結(jié)合。法使用小分子標記的疊氮化物(Azide)，無需DNA變性，操作更便捷，兼容性好，檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。本試劑盒檢測快速。相對于BrdU法，本試劑盒采用BeyoClick?EdU法檢測新合成的DNA，所需時間縮短。經(jīng)本試劑盒處理后，增殖的細胞呈棕色，可以用普通光學顯微鏡進行觀察。HeLa細胞用本試劑盒檢測細胞增殖的效果參見圖3。圖3.HeLa細胞用本試劑盒檢測細胞增殖的效果圖。無EdU組觀察不到棕色染色(左側(cè)一列)；EdU(10μM)孵育2小時組有明顯的棕色染色(中間一列)；而用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)提前預處理0.5小時后，棕色染色減弱，說明DNA合成被抑制后，EdU的摻入被抑制(右側(cè)一列)。EdU細胞增殖檢測試劑盒怎樣使用？上海東寰告訴您。河南EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

更準確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完整；更簡單--無需抗原抗體反應，基于小分子化學反應的檢測方法，簡單高效，反應單需要幾分鐘；更靈敏--無需抗體，檢測染料單為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測；更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期單需2.5小時；更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。rdU需要DNA變性后才能與抗體結(jié)合，導致BrdU、Hoechst染色彌散，邊緣模糊不清；而EdU邊緣清晰完整，檢測更靈敏、更準確江蘇品質(zhì)好的EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家好EdU細胞增殖檢測試劑盒使用時的注意事項。

    按照以下的表格進行染色反應液的配制：染色反應液組分500μl1ml2ml5ml1×反應緩沖液430μl860μlmlml催化劑溶液20μl40μl80μl200μlTAMRA紅色熒光溶液μlμl5μlμl緩沖添加劑50μl100μl200μl500μl3、每孔加入100μl配置好的檢測混合液，以覆蓋細胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘；4、棄染色反應液，加入100μlTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；5、棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色1、將Hoechst33342用RNase-free水溶液1：1000進行稀釋得到終濃度為5μg/ml的1×Hoechst染色液；2、每孔加入100μl1×Hoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；3、每孔加入100μlPBS洗細胞兩次，去掉洗液。圖像獲取及分析建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。

Jurkat細胞只用EdU標記(左列)，或在標記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列)，2小時后染色，然后通過流式細胞儀進行檢測。從流式結(jié)果圖中可以看出，EdU標記的細胞有較高比例的綠色熒光陽性細胞，呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽性(強染色)的兩個峰，分別對應于未增殖細胞和增殖細胞。經(jīng)過Hydroxyurea處理的細胞，綠色熒光陽性的細胞幾乎完全消失，剩下一個綠色熒光陰性的峰。Hela細胞只用EdU標記(左列)，或在標記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列)，2小時后染色（步驟染Hoechst，方便觀察增殖細胞比例），然后通過熒光顯微鏡進行檢測。鏡下可見，*EdU標記的細胞有一部分染上綠色熒光的增殖細胞，未增殖細胞的細胞核呈藍色單染。你知道EdU細胞增殖檢測試劑盒的特點嗎？

使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀或熒光酶標儀進行檢測，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-ContentScreening,HCS)。對6孔板培養(yǎng)的細胞（每孔500μl的Click反應液）、96孔板培養(yǎng)的細胞（每孔50μl的Click反應液）、每管細胞數(shù)量為10-100萬的流式細胞儀檢測（每管500μl的Click反應液）以及冰凍或石蠟切片的檢測（每個樣品100-200μl的Click反應液），不同規(guī)格的本產(chǎn)品可以提供的反應的量詳見說明書中的表。光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518nm；Hoechst33342：藍色熒光，Ex/Em=346/460nm,boundtoDNA。EdU細胞增殖檢測試劑盒的基本結(jié)構(gòu)級應用。北京口碑好的EdU細胞增殖檢測試劑盒

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這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細胞，檢測靈敏度不是很高，通常*適用于流式細胞儀檢測。在進行科學研究時，上述這些基于細胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2-脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。河南EdU細胞增殖檢測試劑盒購買