注：1）培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2）孵育時間至少2小時，可延長至24小時后再檢測也可以。4、以1×PBS清洗細胞兩次，每次5分鐘，以除去未摻入RNA的EU殘留。注：貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。細胞的固定和通透1、每孔加入150μl細胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；注：1)該試劑盒配備了細胞固定液，也可以使用含4%多聚甲醛的PBS來進行細胞固定；2)如果使用其他的細胞固定劑建議用DEPC水來配置，避免RNA酶降解細胞內(nèi)的RNA。2、每孔加入150μl2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘；3、棄甘氨酸溶液，每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；4、每孔加入300μlTritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；5、每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；EU染色1、通過用10：1去離子水稀釋10×反應緩沖液進行配制1×EU反應緩沖液；2、按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報廢或更換。EdU細胞增殖檢測試劑盒的基本結(jié)構(gòu)級應用。山東EdU細胞增殖檢測試劑盒評價

EdU染色(a)通過用10:1去離子水稀釋10x反應緩沖液進行配制1xEdU反應緩沖液；(b)按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報廢或更換。(c)按照以下的表格進行染色反應液的配制：該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應用于流式細胞儀檢測。湖北EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢EdU細胞增殖檢測試劑盒，有哪些好處值得選擇？

    避免反復凍融。如短時間內(nèi)需多次重復使用，請于4℃避光保存，有效期半年。使用前須知該試劑是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。實驗準備1、蓋玻片2、1×PBS（）（用DEPC水配置）3、含TritonX-100的PBS（用DEPC水配置）4、甘氨酸溶液(2mg/ml)（用DEPC水配置）5、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿實驗參考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培養(yǎng)基100μl200μl300μl500μl1ml染色反應液100μl200μl300μl500μl1ml實驗步驟(以96孔板，HK2貼壁細胞為例)細胞培養(yǎng)取對數(shù)生長期細胞，以每孔4×103~1×105細胞接種于96孔板中，培養(yǎng)至正常狀態(tài)。EU標記1、將細胞完全培養(yǎng)基中按照500：1的比例加入EU溶液，制成2×EU標記培養(yǎng)基；2、提前將2×EU標記培養(yǎng)基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得1×EU溶液，其中EU的終濃度為500μM；注：1）我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2）配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；3、每孔加入300μl含EU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基。

傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結(jié)合，必須先進行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導致錯誤結(jié)果。如果變性不充分，會導致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導致細胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導致DNA斷裂，甚至降解，導致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致，造成難以確保實驗重復性，且容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。EdU細胞增殖檢測試劑盒的優(yōu)點體現(xiàn)在哪？

通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應，把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性，廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。EdU細胞增殖檢測試劑盒運用再哪些領域？湖北EdU細胞增殖檢測試劑盒公司

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細胞增殖能力的檢測是評估細胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。公認的精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成。初使用的通過檢測DNA合成來檢測細胞增殖的方法是放射性標記核苷摻入法，如氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。細胞活性的細胞增殖檢測方法，能檢測到細胞的總體增殖效果，但無法檢測到單個的增殖細胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。上述這些基于細胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法山東EdU細胞增殖檢測試劑盒評價