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傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性,抗原修復(fù),抗原抗體過(guò)夜孵育,操作步驟復(fù)雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大,嵌入DNA分子中的BrdU無(wú)法直接與BrdU抗體結(jié)合,必須先進(jìn)行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但變性的程度可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。如果變性不充分,會(huì)導(dǎo)致BrdU難以暴露,無(wú)法檢測(cè),而且變性過(guò)程從邊緣向中間滲透,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核DNA的變性不均勻,邊緣模糊不清。如果變性過(guò)分,則會(huì)導(dǎo)致DNA斷裂,甚至降解,導(dǎo)致核染不均一。另外,不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致,造成難以確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性,且容易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。上海EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的價(jià)格是多少?湖南咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒哪家好
EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過(guò)一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應(yīng)非常迅速,被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction),其反應(yīng)原理參見(jiàn)圖1。通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng),新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記,從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)設(shè)備檢測(cè)到增殖的細(xì)胞。EdU檢測(cè)法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU,在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。湖北咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)上海東寰告訴您EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的運(yùn)用方式。
EdU染色(a)通過(guò)用10:1去離子水稀釋10x反應(yīng)緩沖液進(jìn)行配制1xEdU反應(yīng)緩沖液;(b)按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現(xiàn)用現(xiàn)配;注:緩沖添加劑為白色粉末,較難準(zhǔn)確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應(yīng)超過(guò)±20%,且該粉末較易氧化,使用后請(qǐng)旋緊管蓋,如試劑出現(xiàn)棕黃色,則需報(bào)廢或更換。(c)按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制: 該產(chǎn)品是采用成像檢測(cè)方法對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理,固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測(cè)。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
細(xì)胞增殖是評(píng)價(jià)細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團(tuán)在天然化合物中很少見(jiàn),能夠在DNA復(fù)制時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應(yīng)即可直接并準(zhǔn)確地檢測(cè)出DNA復(fù)制活性,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)、病毒繁殖等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種藥物的細(xì)胞增殖及活力篩選實(shí)驗(yàn)。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在哪?
與BrdU檢測(cè)方法相比,EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無(wú)需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。EdU(5-Ethynyl-2’- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子中,通過(guò)基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性,適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究,尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒使用時(shí)的注意事項(xiàng)。安徽口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)
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細(xì)胞增殖的能力是評(píng)價(jià)細(xì)胞、代謝、生理、病理狀況、細(xì)胞活性、基因毒性等的重要指標(biāo)之一,細(xì)胞增殖雖然與多種因素有關(guān),比如細(xì)胞代謝活性、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白表達(dá)、ATP的濃度等等,但是檢測(cè)細(xì)胞增殖現(xiàn)象的*直接*準(zhǔn)確的方法就是用熒光探針直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)DNA的合成,這種方法是研究細(xì)胞增殖、信號(hào)通路、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法。目前,基于DNA的合成原理,人們*初開(kāi)發(fā)了工具是BrdU染色法,但是這種方法操作耗時(shí)長(zhǎng),往往需要過(guò)夜處理細(xì)胞,操作繁雜,比如需要DNA變性、抗原修復(fù)以及抗原抗體反應(yīng)等操作,后來(lái)在BrdU的基礎(chǔ)上,人們開(kāi)發(fā)出了**性的探針--EdU,這種方法不需要繁雜的操作,節(jié)約時(shí)間,且反應(yīng)更靈敏和準(zhǔn)確。并且與MTT/WST-1或者CCK-8這種依靠化學(xué)顯色法只能得到一個(gè)折線圖的方法相比,EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)法可以得到高清細(xì)胞增殖現(xiàn)象數(shù)據(jù)圖,可視化展示數(shù)據(jù)、更直觀、更具視覺(jué)效果!湖南咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒哪家好
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