PFKL促進脂滴/線粒體偶聯(lián)的脂解過程

來源：發(fā)布時間：2024-09-21

PFKL通過促進PLIN2與CPT1A的相互作用，促進線粒體偶聯(lián)脂滴的脂解過程.

第一步，脂滴中確定目標蛋白分子

質譜檢測和分析，結果發(fā)現(xiàn)和脂滴相互作用的線粒體外膜蛋白CPT1A（圖1a）。該蛋白負責催化長鏈脂肪酸輔酶a (CoA)，將?；匏俎D移到肉堿上，可能是參與線粒體偶聯(lián)脂滴的重要分子。

第二步，確定PLIN2與CPT1A相互作用及其對脂滴/線粒體偶聯(lián)的影響

內源Co-IP實驗顯示，脂滴包被蛋白PLIN2與CPT1A結合（圖1b-c）?；罴毎上穹治鲲@示，在葡萄糖剝奪時，CPT1A相關的線粒體被招募到PLIN2包被的脂滴上（圖1d）。敲減CPT1A阻斷了脂滴與線粒體之間的歐聯(lián)，同時葡萄糖剝奪的總脂滴增加（圖1e-f）。這些結果表明PLIN2和CPT1A的相互作用對脂滴與線粒體的結合以及隨后的脂滴水解至關重要。

第三步，葡萄糖剝奪，增強了PFKL與PLIN2結合，這對PLIN2和CPT1A互作、脂滴/線粒體的偶聯(lián)、脂滴脂解至關重要。

Co-IP分析發(fā)現(xiàn)，使用糖酵解代謝物處理葡萄糖剝奪的細胞不影響PLIN2與CPT1A的結合（圖1g），表明葡萄糖剝奪誘導的PLIN2和CPT1A互作與糖酵解代謝產(chǎn)物無關。

脂滴提取物質譜分析顯示PFKL是一種脂滴相關蛋白（圖1a），在HCC中高表達。Co-IP實驗發(fā)現(xiàn)，葡萄糖剝奪增強PFKL與PLIN2結合（圖1h）。免疫熒光顯示葡萄糖剝奪后PFKL與PLIN2共定位（圖1i）。IP-WB檢測顯示PFKL在葡萄糖缺乏條件下與脂滴結合（圖1j）。表明葡萄糖剝奪誘導PFKL與脂滴上的PLIN2結合。

另外，Co-IP分析提示，敲減PFKL抑制了葡萄糖剝奪誘導的PLIN2與CPT1A互作（圖1k）、脂滴和線粒體之間的系結（圖1l）以及總脂滴的減少（圖1m）。