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天津ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

來源: 發(fā)布時間:2024-09-03

Mayer等(2023)以measles virus(麻疹病毒,MV)為例,評估了四種不同核酸酶(BenzonaseTM、DeneraseTM、M-SAN HQ中鹽核酸酶及SAN HQ高鹽核酸酶)對于染色質(zhì)DNA去除的效果。Vero細(xì)胞通過微載體貼壁培養(yǎng)來生產(chǎn)麻疹病毒MV,72h后收獲上清液,使用3μm cellulose filter(Sartorius)過濾后分裝多份,置于-80℃保存便于后續(xù)使用。在解凍后的上清中調(diào)節(jié)對應(yīng)鹽濃度,并加入50 U/ml核酸酶,37℃孵育2hr進行消化,消化后留樣;將消化后上清液過Capto Core 700 (Cytiva)柱子,收集流穿液,之后洗雜、洗脫,并分別留樣。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn),相比Benzonase等傳統(tǒng)核酸酶,在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶更高效將染色質(zhì)DNA剪切成更小片段,甚至將核小體DNA剪切更徹底。江西中鹽核酸酶服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。天津ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

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M-SAN HQ中鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如,該酶適宜的鹽濃度(NaCl)范圍是0mM-225mM,能耐受400mM NaCl濃度。適宜反應(yīng)溫度為20℃-37℃,能耐受4℃-40℃。Mg2+濃度大于0.5mM即可,在4-15mM范圍即可表現(xiàn)更高活性。跟其他核酸酶不同,M-SAN HQ中鹽核酸酶不是堿性核酸酶,其適宜pH為7.2-8.7,能耐受6.3-8.7。綜合這些特點,在生理鹽條件下,M-SAN HQ的酶活是傳統(tǒng)全能核酸酶的5倍左右。因此,可以說M-SAN HQ是更適合生理鹽條件下的核酸酶。四川M-SAN中鹽核酸酶70950-150南京中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。

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M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下的優(yōu)勢,讓其成為生物生產(chǎn)工藝中去除核酸污染的更好選擇。經(jīng)過多年的市場宣傳,M-SAN HQ中鹽核酸酶品質(zhì)已得到多個全球TOP CDMOs認(rèn)可,納入其工藝開發(fā)篩選平臺。此外,目前全球有10+臨床項目涉及的病毒載體生產(chǎn)用到M-SAN HQ中鹽核酸酶。對于同一個項目,用M-SAN HQ替代Benzonase全能核酸酶,酶量減少、HCD去除效果更優(yōu)、病毒載體產(chǎn)量也有一定程度的提高,酶相關(guān)成本降為原有的1/5以內(nèi),極大降低了病毒載體生產(chǎn)成本。

一般來說,生物生產(chǎn)工藝用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注冊商標(biāo))為主,能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通過E.coli發(fā)酵生產(chǎn)得到。該酶的適宜反應(yīng)條件是低鹽濃度范圍(<100mM鹽濃度),且酶活隨著鹽濃度上升而下降,在300mM鹽濃度時酶活幾乎喪失。對于細(xì)胞基因藥物常用的兩種病毒載體LV和AAV,LV由于含有脂包膜結(jié)構(gòu)一般都在生理鹽條件下存在,而AAV在高鹽條件下不易團聚、更穩(wěn)定。而在生理鹽濃度及更高濃度條件下,Benzonase活性受到抑制。廣州中鹽核酸酶價格哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。

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ArcticZymes Technologies提供獨特特性的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases,SANs)系列產(chǎn)品,主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內(nèi)切酶,跟Benzonase一樣能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA;都來自于深海microbes,通過Pichia pastoris發(fā)酵生產(chǎn)得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同,——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM,而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。ArcticZymes廠家管控整個供應(yīng)鏈及生產(chǎn)流程,協(xié)助客戶進行文件審計及現(xiàn)場審計。四川M-SAN中鹽核酸酶70950-150

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慢病毒大規(guī)模純化的捕獲步驟包括:膜過濾澄清,隨后切向流過濾/超濾或者體積排阻色譜濃縮。此外,需用核酸酶(benzonase或M-SAN HQ中鹽核酸酶)來去除細(xì)胞殘留的、質(zhì)粒來源的DNA污染。這兩個步驟順序可以調(diào)整,依據(jù)項目工藝而定。兩種工藝路線各有優(yōu)缺點:先用核酸酶消化的優(yōu)點是可去除大的DNA片段,且后續(xù)步驟可以去除殘留核酸酶;但所用的核酸酶的量也非常大。與此相反,將核酸酶步驟后置的優(yōu)點是大幅降低核酸酶的量(成本降低);但后面的步驟必須有將核酸酶去除的能力。此外,后期用核酸酶的缺點是核酸污染可能會結(jié)合慢病毒顆粒形成沉淀,進而導(dǎo)致慢病毒在純化中流失,從而影響得率。天津ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160