免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是一種基于抗原與抗體特異性結(jié)合用于研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的方法。常用于候選目標(biāo)蛋白質(zhì)之間是否有相互作用,也用于確定與已知蛋白質(zhì)互作的其它未知蛋白質(zhì)相互作用?;驹恚寒?dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)流程:蛋白質(zhì)樣本收集-A抗體沉淀目的蛋白A-SDS-PAGE分離-WB檢測(cè)B蛋白或者質(zhì)譜鑒定互作蛋白。Co-IP的優(yōu)點(diǎn)主要包括高特異性、靈敏度高、與質(zhì)譜技術(shù)兼容、操作相對(duì)簡(jiǎn)便。Co-IP技術(shù)雖廣泛應(yīng)用,但受抗體特異性、低豐度蛋白、樣品制備和瞬時(shí)互作等限制,需結(jié)合其他方法驗(yàn)證!蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot
Co-IP(免疫共沉淀)實(shí)驗(yàn)操作的要點(diǎn)。1.細(xì)胞裂解:確保采用溫和的裂解條件,以保持細(xì)胞內(nèi)存在的蛋白間相互作用。使用非變性裂解液進(jìn)行裂解和洗滌。2.抗體固定:選擇經(jīng)過驗(yàn)證的抗體,以減少假陽性結(jié)果。注意抗體與緩沖液的比例,避免抗體稀釋過度或過多。3.抗體結(jié)合:將抗體與樣品混合,確??贵w與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合。4.磁珠或瓊脂糖添加:將抗體固定的磁珠或瓊脂糖加入混合物中,使其與抗體-蛋白復(fù)合物結(jié)合。5.沉淀:通過磁珠或瓊脂糖的沉降,分離出蛋白復(fù)合物。6.洗脫:使用洗脫緩沖液將蛋白質(zhì)復(fù)合物從磁珠或瓊脂糖上洗脫下來。7.增加洗脫之前的洗滌次數(shù)或在免疫共沉淀緩沖液中加入Triton X-100,以降低非特異性結(jié)合。遵循這些操作要點(diǎn),可以確保Co-IP實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,從而得到準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)相互作用結(jié)果。中國(guó)香港互作蛋白檢測(cè)CoIP Western Blot檢測(cè)Co-IP技術(shù)可靠,但需注意潛在限制與影響因素,綜合驗(yàn)證確保準(zhǔn)確性!
IP-Mass(免疫沉淀-質(zhì)譜)技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法,用于研究蛋白質(zhì)相互作用和差異蛋白質(zhì)分析。該技術(shù)首先利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。然后,這些復(fù)合物被吸附到固相載體上,經(jīng)過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。接下來,蛋白質(zhì)復(fù)合物從載體上洗脫下來,并通過質(zhì)譜分析進(jìn)行鑒定和檢測(cè)。質(zhì)譜分析是IP-Mass技術(shù)的重要部分,它可以提供關(guān)于蛋白質(zhì)的質(zhì)量、荷質(zhì)比和豐度等信息。通過對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)的分析,可以鑒定出與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白質(zhì),以及蛋白質(zhì)之間的相互作用強(qiáng)度和特異性。IP-Mass技術(shù)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。它不僅可以用于研究蛋白質(zhì)相互作用,還可以用于差異蛋白質(zhì)分析,例如在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化。
Co-IP(免疫共沉淀)和ChIP(染色質(zhì)免疫沉淀)研究對(duì)象和應(yīng)用方面的區(qū)別。研究對(duì)象:Co-IP主要研究的是蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用,而ChIP則主要用于研究DNA(啟動(dòng)子)與蛋白質(zhì)(如轉(zhuǎn)錄因子等)之間的相互作用。應(yīng)用方面:Co-IP常用于驗(yàn)證兩種蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)存在相互作用,是確定蛋白質(zhì)復(fù)合物組成的有效手段。而ChIP則更常用于研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合情況,揭示轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)制,也是確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定基因組區(qū)域結(jié)合的蛋白質(zhì)的一種很好的方法。總的來說,Co-IP和ChIP各有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用價(jià)值,選擇哪種方法取決于研究的具體問題和目標(biāo)。Co-IP實(shí)驗(yàn)檢測(cè):制備樣品、裂解細(xì)胞、免疫沉淀、WB檢測(cè)!
Co-IP(免疫共沉淀)和ChIP(染色質(zhì)免疫沉淀)是兩種常用于研究蛋白質(zhì)與DNA或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)原理方面的區(qū)別:Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結(jié)合,將目標(biāo)蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來,進(jìn)而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并通過超聲或酶處理將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段。入門Co-IP實(shí)驗(yàn),需理解原理、選對(duì)抗體、處理樣本、嚴(yán)控操作,安全細(xì)心,不斷積累經(jīng)驗(yàn)!天津蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-mass spectrometry
Co-IP技術(shù)利用抗原抗體結(jié)合,研究蛋白質(zhì)互作,揭示其功能機(jī)制的有力工具!蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一種在生物藥物領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù),主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)通過利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白與其相互作用的蛋白一同沉淀下來,從而揭示蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系。在蛋白泛素化研究方面,Co-IP技術(shù)也發(fā)揮著重要作用。通過該技術(shù),研究人員可以鑒定并驗(yàn)證與泛素連接酶和泛素受體相互作用的蛋白質(zhì),進(jìn)一步揭示泛素化修飾的調(diào)控機(jī)制。同時(shí),結(jié)合質(zhì)譜分析,Co-IP技術(shù)還可以鑒定泛素化修飾的靶標(biāo)蛋白質(zhì)及其相互作用蛋白質(zhì),揭示泛素化修飾在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝調(diào)控等生命過程中的功能和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot