免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能檢測不到低親和力和瞬間的相互作用：低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間的相互作用可能檢測不到，這可能導(dǎo)致某些重要的相互作用被遺漏。不能確保直接相互作用：免疫共沉淀不能保證沉淀的蛋白復(fù)合物是由直接相互作用的兩種蛋白組成。兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。靈敏度限制：免疫共沉淀的靈敏度不如某些其他技術(shù)，如親和色譜，這可能影響到對低豐度蛋白或微弱相互作用的研究。樣本純度要求高：如果將蛋白復(fù)合物直接進(jìn)行質(zhì)譜分析，需要得到較高純度和濃度的蛋白復(fù)合物樣品，這并非易事，并且成本較高。對抗體要求高：用于免疫共沉淀的抗體不是總是與操作相合適，與Western blotting或者 ELISA相比容易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。IP-Mass技術(shù)結(jié)合免疫沉淀與質(zhì)譜分析，研究蛋白互作與差異，助力生物醫(yī)學(xué)研究！河北相互作用蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種經(jīng)典的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的方法，它基于抗體和抗原之間的專一性作用。該技術(shù)主要用于確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)的生理性相互作用?；驹恚寒?dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留下來。通過利用預(yù)先固化在agarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體來免疫沉淀A蛋白，與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。隨后，通過蛋白變性分離，可以對B蛋白進(jìn)行檢測，從而證明兩者之間的相互作用。重慶CoIP-mass spectrometry檢測IP-Mass技術(shù)是一種結(jié)合了免疫沉淀和質(zhì)譜分析的方法。

免疫共沉淀實驗步驟主要包括以下五個部分：樣品處理：將細(xì)胞或組織樣品進(jìn)行裂解，得到待檢測的蛋白質(zhì)混合物，并加入蛋白酶抑制劑以避免目標(biāo)蛋白被降解?？贵w處理：將專一的抗體連接到親和樹脂上，如蛋白A的親和樹脂或蛋白G的親和樹脂，或?qū)⒌鞍着c其特異性抗體結(jié)合，新形成的復(fù)合物與封閉劑緩慢搖擺在二氧化硅珠上，使碘酸鈣交聯(lián)后節(jié)制反應(yīng)。免疫共沉淀：將有抗體樹脂的樣品與吸附抗體樹脂形成免疫復(fù)合物。洗滌：采用洗滌緩沖液對樣品進(jìn)行洗滌，以去除非特異性的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，同時盡量避免對復(fù)合物的影響。洗滌緩沖液選擇對樣品不會引起較大影響的緩沖液和洗滌劑。蛋白鑒定：將沉淀的復(fù)合物通過SDS-PAGE分離出來，并進(jìn)行Western blotting檢測目標(biāo)蛋白及其配偶蛋白。另一方面，也可以直接使用質(zhì)譜分析檢測。

CoIP-Mass和CoIP-WB檢測要點：

互作蛋白篩選和驗證：數(shù)據(jù)分析以非標(biāo)定量信號強(qiáng)度（LFQintensity和FC>10）作為強(qiáng)陽篩選，以文獻(xiàn)查閱，功能匹配，批量CoIP-WB驗證，提高驗證成功率。理想CoIP-MS結(jié)果的蛋白定量都到超過1000種蛋白。其中絕大部分蛋白為非特異結(jié)合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信號強(qiáng)度和差異倍數(shù)作為參考（相對強(qiáng)信號和差異），分析實驗組中明顯定量較高且差異較大的蛋白，作為重要候選蛋白。同時對重要候選蛋白進(jìn)行STRING互作分析，文獻(xiàn)分析，目的蛋白功能匹配分析，選擇Top的4-5個蛋白進(jìn)行CoIP-WB驗證，提高CoIP-WB成功率。 Co-IP實驗要點：樣品新鮮、抗體特異、偶聯(lián)充分、洗滌徹底，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠！

IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）實驗流程主要包括以下步驟：樣品制備：收集細(xì)胞或組織樣品，進(jìn)行適當(dāng)?shù)牧呀馓幚?，以釋放?xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。免疫沉淀：將特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。隨后，將復(fù)合物與固相載體（如磁珠）結(jié)合，通過洗滌去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。電泳分離：將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)分子量大小將蛋白質(zhì)分離成不同的條帶。轉(zhuǎn)膜：將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上，以便進(jìn)行后續(xù)的Western Blot檢測。Western Blot檢測：利用特異性抗體檢測目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白，觀察并記錄結(jié)果。以上步驟完成后，可以對Western Blot結(jié)果進(jìn)行分析，從而驗證蛋白質(zhì)之間的相互作用情況。CoIP實驗內(nèi)源檢測與外源檢測的優(yōu)缺點。內(nèi)蒙古免疫共沉淀檢測CoIP-WB

Co-IP技術(shù)直接、特異、靈敏，是研究蛋白質(zhì)相互作用的有力工具，揭示生命奧秘！河北相互作用蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測

Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)是一種在生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的實驗方法，主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)利用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，并通過與磁珠或瓊脂糖等固相支持物的結(jié)合，將復(fù)合物從復(fù)雜的細(xì)胞或組織提取物中分離出來。這種分離過程是在非變性條件下進(jìn)行的，因此可以保留蛋白質(zhì)間的天然相互作用狀態(tài)。Co-IP技術(shù)的主要優(yōu)勢在于其直接性、特異性和靈敏度。通過選擇特異性強(qiáng)的抗體，研究人員能夠準(zhǔn)確地捕獲目標(biāo)蛋白及其相互作用伙伴，從而揭示蛋白質(zhì)在生命過程中的功能和調(diào)控機(jī)制。此外，該技術(shù)還可以用于研究間接相互作用的蛋白，如蛋白復(fù)合物的多種成分。總之，Co-IP技術(shù)為深入研究蛋白質(zhì)相互作用提供了有力工具，有助于揭示蛋白質(zhì)在生命活動中的重要作用。河北相互作用蛋白檢測CoIP-mass spectrometry檢測