Co-IP(免疫共沉淀)和ChIP(染色質(zhì)免疫沉淀)是兩種常用于研究蛋白質(zhì)與DNA或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)原理方面的區(qū)別:Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結(jié)合,將目標(biāo)蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來,進(jìn)而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并通過超聲或酶處理將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段。Co-IP外源檢測(cè)靈敏可控但難模擬體內(nèi)環(huán)境,內(nèi)源檢測(cè)真實(shí)但背景復(fù)雜,選擇需權(quán)衡實(shí)驗(yàn)?zāi)康?!上海蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot
Co-IP(免疫共沉淀)技術(shù)的基本原理是利用抗原與抗體之間的專一性作用,將特定蛋白質(zhì)及其與之相互作用的蛋白質(zhì)一同沉淀下來。這種技術(shù)常用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用和復(fù)合物形成。在Co-IP實(shí)驗(yàn)中,研究人員首先會(huì)制備針對(duì)目標(biāo)蛋白的特異性抗體,并將其與固相載體偶聯(lián)。然后,將含有目標(biāo)蛋白及其相互作用伙伴的細(xì)胞或組織裂解液與抗體-載體復(fù)合物混合。由于抗體與目標(biāo)蛋白之間的特異性結(jié)合,目標(biāo)蛋白及其相互作用伙伴會(huì)被固定在抗體-載體復(fù)合物上。接下來,通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì),以確保沉淀下來的蛋白質(zhì)復(fù)合物是特異性的。然后,使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液將目標(biāo)蛋白及其相互作用伙伴從抗體-載體復(fù)合物上洗脫下來,以便進(jìn)行后續(xù)的分析和檢測(cè)。中國(guó)香港互作蛋白檢測(cè)CoIP-mass spectrometryCoIP實(shí)驗(yàn)需設(shè)對(duì)照組,排除非特異結(jié)合,確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠!
CoIP-Mass是一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白互作組的套餐技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù),對(duì)目的蛋白在特定細(xì)胞/組織內(nèi)的互作蛋白,進(jìn)行系統(tǒng)的檢測(cè)和分析。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細(xì)胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測(cè),或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作組差異研究。因此,該技術(shù)是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)前置技術(shù)。CoIP-WB是一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白互作的驗(yàn)證技術(shù)。該技術(shù)通過聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和WesternBlot蛋白檢測(cè)技術(shù),對(duì)目的蛋白在特定細(xì)胞/組織內(nèi)的互作關(guān)系進(jìn)行探究,明確蛋白直接的相互作用關(guān)系。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細(xì)胞/組織中的蛋白互作檢測(cè)驗(yàn)證,或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作差異研究。因此,該技術(shù)是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)檢測(cè)技術(shù)。
CoIP-Mass互作組驗(yàn)證,即在互作組分析篩選的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步利用CoIP-WB技術(shù)對(duì)感興趣分子進(jìn)行靶向檢測(cè),更加精細(xì),也是互作組驗(yàn)證的必由之路。驗(yàn)證成功上岸的基礎(chǔ)是理想的互作組數(shù)據(jù)庫和豐富的分析經(jīng)驗(yàn),方能事半功倍。廣州基云生物,在IP互作組檢測(cè)和關(guān)鍵機(jī)制分子篩選驗(yàn)證領(lǐng)域,具有豐富的經(jīng)驗(yàn),您的互作機(jī)制研究。
IP-WB(免疫沉淀-Western Blot)實(shí)驗(yàn)流程主要包括以下步驟:樣品制備:收集細(xì)胞或組織樣品,進(jìn)行適當(dāng)?shù)牧呀馓幚?,以釋放?xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。免疫沉淀:將特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。隨后,將復(fù)合物與固相載體(如磁珠)結(jié)合,通過洗滌去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。電泳分離:將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,根據(jù)分子量大小將蛋白質(zhì)分離成不同的條帶。轉(zhuǎn)膜:將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上,以便進(jìn)行后續(xù)的Western Blot檢測(cè)。Western Blot檢測(cè):利用特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白,觀察并記錄結(jié)果。以上步驟完成后,可以對(duì)Western Blot結(jié)果進(jìn)行分析,從而驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間的相互作用情況。新手如何入門CoIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
IP-WB(免疫沉淀-Western Blot)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間的相互作用。在IP-WB實(shí)驗(yàn)中,首先使用特異性抗體將目標(biāo)蛋白從細(xì)胞或組織裂解液中免疫沉淀下來。這一步驟確保了只有與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)被富集。隨后,將免疫沉淀得到的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,使蛋白質(zhì)按照分子量大小分離。接著,通過Western Blot技術(shù),利用特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白或其相互作用伙伴的存在。Western Blot利用抗體與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合,通過顯色反應(yīng)可視化目標(biāo)蛋白,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)相互作用的驗(yàn)證。IP-WB技術(shù)結(jié)合了免疫沉淀的高特異性與Western Blot的高靈敏度,能夠有效地驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間的相互作用,并為進(jìn)一步的功能研究和藥物開發(fā)提供有力支持。免疫共沉淀法證實(shí)蛋白互作,基于抗體專一性,揭示生理性相互作用。上海蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot
如何快速開展Co-IP實(shí)驗(yàn)。上海蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot
免過疫共沉淀技術(shù)是一種研究?jī)煞N蛋白在體內(nèi)是否存在相互作用的有效方法,通過抗體和已知蛋白結(jié)合,從而捕獲整個(gè)已知蛋白復(fù)合物,進(jìn)而研究復(fù)合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。
Co-IP免疫共沉淀技術(shù)有什么優(yōu)缺點(diǎn)?
優(yōu)點(diǎn):
1.在Co-IP分析中,誘餌蛋白和獵物蛋白是天然構(gòu)象的。
2.誘餌蛋白與獵物蛋白的相互作用發(fā)生在體內(nèi),受外界影響小。
3.不需要克降和異源表達(dá),如果有抗體,該分析很快。
缺點(diǎn):
1.低親和力或蛋白質(zhì)間短暫的相互作用可能不會(huì)被檢測(cè)到。
2.由于不能排除其他蛋白參與的可能,Co-IP的結(jié)果不能確定相互作用是直接的還是間接的。
3.該方法非通用,需要有特定的抗體。 上海蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-Western Blot