當(dāng)濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。超濾離心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成，具有強度高和化學(xué)惰性。金華3K超濾離心管哪里能買

使用后用0.1M NaOH泡24h，然后20%乙醇浸泡保存。這個我是聽老板們說的，的確乙醇泡完后孔徑會增大，基本就是5-10KD較大，也就是說如果你的蛋白在21KD以上，應(yīng)該沒問題?；蛘呖梢圆挥靡掖寂?，用NaOH洗之后直接用無菌水保存，每周換一下液體，應(yīng)該沒有問題?？纯凑f明書不就結(jié)了！我原來在CRO的時候一直是重復(fù)用的，也沒見什么不好啊！短期會用的話，用20%的乙醇泡著，回頭拼命用millipore的水充干凈，然后在用樣品緩沖液平衡一下就好，至于有些人說的改變孔徑，也沒那么大影響的，你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個月以內(nèi)不用的話，建議用100mM的NaOH保存！更長時間的話加0.02%的疊氮鈉，但那個東西強致疾病物，不建議使用。理論上截留目標(biāo)物，孔徑應(yīng)選1/3~1/5的膜；透過目標(biāo)物，孔徑應(yīng)選5-10倍的膜。江蘇小型超濾離心管能干什么超濾離心管可以通過調(diào)整旋轉(zhuǎn)速度、溫度等參數(shù)來控制分子篩選效果。

超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用，不過對于蛋白質(zhì)樣本處理，特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化，但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結(jié)合的程度隨著個別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失，大多數(shù)情況下，在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率，因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預(yù)先用較高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時以上，蒸餾水徹底沖洗柱子，再用蒸餾水離心一次以徹底除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用，需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。

超濾離心管，備有四種材質(zhì)的超濾膜：聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart，可根據(jù)不同要求靈活選用；兩種回收濃縮液的方法：既可用吸管直接吸取并回收，又可將離心管放入離心機反甩，將濃縮液甩入回收帽中，加蓋保存。這兩種方法都可使?jié)饪s液達(dá)到近乎完全回收；截留分子量普遍，配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜；新推出產(chǎn)品膜2K型，具有極低的蛋白吸附特性，高流速、高通量，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，之后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達(dá)到1000倍以上，基本上可以達(dá)到換buffer的目的。超濾離心管通常有不同孔徑大小的超濾膜供選擇，以便過濾出不同大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。

蛋白質(zhì)濃縮和替代緩沖液常用的超濾管，微孔(mwco10kd)常用的micon-ultra-15超濾管。根據(jù)靶蛋白的分子量、濃縮前的體積和濃縮的靶體積，還可提供不同尺寸和尺寸的其他類型的mwco超濾管。它可以重復(fù)使用。1。選擇合適的超濾管主要考慮分子量和濃度。通常靶蛋白的分子量不應(yīng)大于靶蛋白分子量的1/3。例如，當(dāng)靶蛋白的分子量為35kDa時，可以選擇靶蛋白分子量為10kDa的超濾管。如果靶蛋白的分子量約為10kd，則可使用分子量為3kd的超濾管。2。新購買的超濾是干燥的。使用前加入Milliq水。水的體積完全覆蓋在膜上，冰浴或冰箱被預(yù)先冷卻幾分鐘。倒出水后，可以加入蛋白質(zhì)溶液。蛋白質(zhì)添加量不超過管頂白線。超濾管在加入蛋白質(zhì)溶液前需要在冰上預(yù)先冷卻。三。平衡。超濾離心管適用于從細(xì)胞培養(yǎng)基、血漿、尿液等樣品中提取蛋白質(zhì)、核酸、多糖等大分子化合物。山東100K超濾離心管報價

使用超濾離心管時要注意控制轉(zhuǎn)速，以避免過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致超濾膜損壞或溢出樣品。金華3K超濾離心管哪里能買

超濾管產(chǎn)品系列包括5種不同的截留分子量(即標(biāo)稱分子量限值, NMWL)。這些超濾管只供研究使用，不適用于診斷程序。1）.濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸（DNA/RNA樣本，單鏈或雙鏈）、噬菌體等微生物樣本。2）.純化組織培養(yǎng)提取液或細(xì)胞裂解液中的大分子成分，去除反應(yīng)液中的引物、接頭或分子標(biāo)記，在HPLC前去除蛋白質(zhì)。3）.除鹽，緩沖液更換，或滲濾。超濾管提供了兩個微量離心管。在操作過程中，一個用于收集濾出液，而另一個用于回收濃縮后的樣本。超濾管的超濾膜含有微量甘油。如果擔(dān)心干擾后續(xù)分析,可用緩沖液或Milli-Q水進(jìn)行預(yù)清洗。如果干擾仍然存在,可用0.1M NaOH清洗,再用緩沖液或Milli-Q8水清洗并甩干。金華3K超濾離心管哪里能買

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