下面是處理和重復(fù)使用超濾管的步驟。將超濾管中的水倒出來,用Milliq水輕輕沖洗幾次。[如管底有可見蛋白質(zhì)沉淀,可先加水,再用設(shè)備頭吹氣,注意不要碰觸膜,吹氣至沉淀懸浮,再倒出,不要沖自來水。)然后加入0.2 mNaOH溶液,室溫放置20分鐘,平衡超濾。在此期間定量管。離心10分鐘。倒出剩余的MaOH溶液,將管芯浸入Milliq燒杯(1L或2L)中。放器數(shù)小時(shí),然后用新水替換,放置數(shù)小時(shí),不斷稀釋Na0E濃度。50ml管道和蓋子用自來水沖洗,內(nèi)壁用Milliq水沖洗。取出浸入水中的芯,并將其加入幾乎滿毫升的水中。在50毫升試管中注入毫升水。慢慢地將芯放入50毫升離心管中,排出一些水。然后蓋上蓋子,4度存放,直到下次使用。一般來說,根據(jù)上述步驟和注意事項(xiàng),每根渠道在三到四年內(nèi)不會(huì)受損。使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意避免振動(dòng)或震動(dòng)造成樣品混亂并影響分離效果。上海100K超濾離心管使用方法
離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔,減小對(duì)膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機(jī),否則離心機(jī)出問題時(shí),無法一時(shí)間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直)。在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。青島3K超濾離心管生產(chǎn)廠商使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意避免過度壓力造成膜破裂或損壞并影響分離效果。
超濾離心管使用注意事項(xiàng):當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
超濾離心管具有快速超濾功能,能夠達(dá)到較高的濃縮倍數(shù),輕松實(shí)現(xiàn)從稀釋和復(fù)雜的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設(shè)計(jì)的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本處理,獲得較高樣本回收率(通常> 90%) ,并達(dá)到30倍的濃縮。根據(jù)標(biāo)稱分子量限值(NMWL)的不同,典型處理時(shí)間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設(shè)計(jì)也較大程度降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢;死體積設(shè)計(jì)能有效防止過度離心使樣本干掉而造成樣本損失。收集濾出液后,濃縮樣本(截留部分)可通過一個(gè)簡(jiǎn)便的倒置(上下反轉(zhuǎn))離心步驟而實(shí)現(xiàn)高效回收。超濾管未經(jīng)消毒,只供一次使用。超濾離心管還可用于制備DNA文庫或RNA文庫,以進(jìn)行基因克隆和功能研究。
離心管主要有塑料、不銹鋼制成,塑料離心管常用資料有聚丙烯(PP).聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC)等。其中PP管性能較好,塑料離心管的優(yōu)點(diǎn)是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度,缺陷是易變形,抗有機(jī)溶劑腐蝕性差,運(yùn)用壽命短;不銹鋼離心管強(qiáng)度大,不變形,能抗凍,抗熱,抗化學(xué)腐蝕,但用時(shí)要防止接觸強(qiáng)腐蝕性的化學(xué)藥品、如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等化學(xué)試劑。這里主要介紹塑料離心管:塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必需蓋嚴(yán),倒置不漏液。管蓋有三種作用:①避免樣品外泄,用于有放射性或強(qiáng)腐蝕性的樣品時(shí)②避免樣品揮發(fā)③支持離心管,避免離心管變形。超濾離心管可以去除混合物中的雜質(zhì)和低分子量化合物,得到高純度的目標(biāo)化合物。河南3K超濾離心管價(jià)格
超濾離心管通常有不同孔徑大小的超濾膜供選擇,以便過濾出不同大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。上海100K超濾離心管使用方法
超濾作為一種膜分離技術(shù),普遍應(yīng)用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質(zhì)則允許透過膜,從而達(dá)到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、快速、高效,可同時(shí)濃縮和純化分子,一般來說超濾的回收率能夠達(dá)到90%以上,因此得到許多人的青睞。超濾濃縮器是一種可以為蛋白質(zhì)樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準(zhǔn)確結(jié)果的一次性超濾離心式過濾裝置,與層析、透析等方法相比,超濾對(duì)被處理的分子更加溫和,不需要有機(jī)萃取,不會(huì)導(dǎo)致蛋白變性,且簡(jiǎn)單高效。潔特6mL規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL以內(nèi)的樣本,離心管內(nèi)包含一個(gè)內(nèi)置豎直的聚醚砜(PES)膜過濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著、高通量的特點(diǎn),可應(yīng)用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD六種不同的截留分子量中。截留分子量標(biāo)識(shí)和體積刻度蝕刻在濃縮器的側(cè)面便于識(shí)別。上海100K超濾離心管使用方法