下面是處理和重復使用超濾管的步驟。將超濾管中的水倒出來,用Milliq水輕輕沖洗幾次。[如管底有可見蛋白質(zhì)沉淀,可先加水,再用設備頭吹氣,注意不要碰觸膜,吹氣至沉淀懸浮,再倒出,不要沖自來水。)然后加入0.2 mNaOH溶液,室溫放置20分鐘,平衡超濾。在此期間定量管。離心10分鐘。倒出剩余的MaOH溶液,將管芯浸入Milliq燒杯(1L或2L)中。放器數(shù)小時,然后用新水替換,放置數(shù)小時,不斷稀釋Na0E濃度。50ml管道和蓋子用自來水沖洗,內(nèi)壁用Milliq水沖洗。取出浸入水中的芯,并將其加入幾乎滿毫升的水中。在50毫升試管中注入毫升水。慢慢地將芯放入50毫升離心管中,排出一些水。然后蓋上蓋子,4度存放,直到下次使用。一般來說,根據(jù)上述步驟和注意事項,每根渠道在三到四年內(nèi)不會受損。使用超濾離心管時應注意避免振動或震動造成樣品混亂并影響分離效果。上海100K超濾離心管使用方法
離心機的加速度調(diào)至較低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法一時間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。青島3K超濾離心管生產(chǎn)廠商使用超濾離心管時應注意避免過度壓力造成膜破裂或損壞并影響分離效果。
超濾離心管使用注意事項:當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
超濾離心管具有快速超濾功能,能夠達到較高的濃縮倍數(shù),輕松實現(xiàn)從稀釋和復雜的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設計的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本處理,獲得較高樣本回收率(通常> 90%) ,并達到30倍的濃縮。根據(jù)標稱分子量限值(NMWL)的不同,典型處理時間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設計也較大程度降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結垢;死體積設計能有效防止過度離心使樣本干掉而造成樣本損失。收集濾出液后,濃縮樣本(截留部分)可通過一個簡便的倒置(上下反轉(zhuǎn))離心步驟而實現(xiàn)高效回收。超濾管未經(jīng)消毒,只供一次使用。超濾離心管還可用于制備DNA文庫或RNA文庫,以進行基因克隆和功能研究。
離心管主要有塑料、不銹鋼制成,塑料離心管常用資料有聚丙烯(PP).聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC)等。其中PP管性能較好,塑料離心管的優(yōu)點是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度,缺陷是易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,運用壽命短;不銹鋼離心管強度大,不變形,能抗凍,抗熱,抗化學腐蝕,但用時要防止接觸強腐蝕性的化學藥品、如強酸、強堿等化學試劑。這里主要介紹塑料離心管:塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必需蓋嚴,倒置不漏液。管蓋有三種作用:①避免樣品外泄,用于有放射性或強腐蝕性的樣品時②避免樣品揮發(fā)③支持離心管,避免離心管變形。超濾離心管可以去除混合物中的雜質(zhì)和低分子量化合物,得到高純度的目標化合物。河南3K超濾離心管價格
超濾離心管通常有不同孔徑大小的超濾膜供選擇,以便過濾出不同大小范圍內(nèi)的目標分子。上海100K超濾離心管使用方法
超濾作為一種膜分離技術,普遍應用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質(zhì)則允許透過膜,從而達到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點是操作簡便、快速、高效,可同時濃縮和純化分子,一般來說超濾的回收率能夠達到90%以上,因此得到許多人的青睞。超濾濃縮器是一種可以為蛋白質(zhì)樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準確結果的一次性超濾離心式過濾裝置,與層析、透析等方法相比,超濾對被處理的分子更加溫和,不需要有機萃取,不會導致蛋白變性,且簡單高效。潔特6mL規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL以內(nèi)的樣本,離心管內(nèi)包含一個內(nèi)置豎直的聚醚砜(PES)膜過濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著、高通量的特點,可應用在3KD、5KD、10KD、30KD、50KD、100KD六種不同的截留分子量中。截留分子量標識和體積刻度蝕刻在濃縮器的側面便于識別。上海100K超濾離心管使用方法